TCS7010 (Aurora A Inhibitor I)

TCS7010 (Aurora A Inhibitor I) est une 2,4-dianilinopyrimidine qui inhibe sélectivement et puissamment l'Aurora A. Elle inhibe efficacement la prolifération des cellules HCT116 et HT29, avec une IC50 de 190 nM et 2,9 μM, respectivement. La sélectivité de ce composé pour l'Aurora A par rapport à l'Aurora B dépend d'un seul acide aminé (Thr217) de l'Aurora A. [1] Dans les cellules KCL-22, il (1-5 μM) augmente la fraction de cellules en G2/M, induit la phosphorylation de l'histone H3 sérine 10 et supprime l'autophosphorylation mitotique de l'Aurora A sur Thr288. Il (0,5-5 μM) supprime également la prolifération cellulaire dans les cellules KCL-22, ainsi que dans les lignées cellulaires leucémiques BCR-ABL-négatives KG-1 et HL-60. Ce composé induit efficacement l'apoptose dans les cellules KCL-22 à 5 μM. [2] Dans une étude récente, il a également été constaté qu'il inhibe la croissance cellulaire des cellules HCT116, HT29 et HeLa, avec une IC50 de 377,6 nM, 5,6 μM et 416 nM. [3]

• Tests d'inhibition des Aurora A et B

  TCS7010 (Aurora A Inhibitor I) est testé au format ELISA en utilisant une fusion GST (pGEX-4T) de l'extrémité N-terminale de l'histone H3 (aa 1-18) comme substrat pour les Aurora A et B. Les plaques sont revêtues de 2 ":"g/mL de substrat dans du PBS, puis bloquées avec 1 mg/mL de I-block dans du PBS. Les réactions de kinase sont menées pendant 40 min avec 5 ng/mL (0,16 nM) d'Aurora A ou 45 ng/mL (1,1 nM) d'Aurora B à 30 ":"M ATP (~ K_m) dans un tampon de kinase. La concentration finale de DMSO est de 4%. Le produit est détecté par incubation avec un anticorps monoclonal de souris anti-phosphohistone H3 (Ser10) 6G3 et un conjugué HRP de mouton anti-souris, suivi d'un lavage et de l'ajout du substrat TMB. Après extinction avec de l'acide phosphorique 1 M, les plaques sont lues à 450 nM.

• Lignées cellulaires

  HCT116 and HT29 cells

• Concentrations

  0.1 nM - 10 μM, dissolved in medium lacking serum and glutamine (dissolved in DMSO as stock solution)

• Temps dincubation

  72 hours

• Méthode

  On day 0, cells are seeded in 384-well plates in 50 μL of complete medium and incubated overnight in a 5% CO₂ atmosphere at 37 °C. TCS7010 (Aurora A Inhibitor I) is added on day 1 in a volume of 10 μL. On day 4, plates are allowed to reach room temperature, and 30 μL Cell Titer-Glo reagent is added to each well to measure total ATP levels. After shaking for 15 min at room temperature, the plates are read.

• Modèles animaux

  BALB/c nude mice bearing ARID1A isogenic tumors

• Dosages

  30 and 60 mg/kg

• Administration

  IP