Atazanavir (BMS-232632) Sulfate

L'Atazanavir inhibe le clivage protéolytique de la polyprotéine précurseur virale gag p55 avec une IC50 d'environ 47 nM dans les cellules H9 infectées par le virus. L'Atazanavir présente une puissante activité antivirale avec une EC50 de 3.89 nM dans les souches RF/MT-2. [1]. L'Atazanavir s'est avéré être un inhibiteur de la glucuronidation de la bilirubine avec une IC50 de 2.4 μM. L'Atazanavir inhibe l'UGT1A1 recombinante avec un Ki de 1.9 μM. [2] L'Atazanavir inhibe la croissance cellulaire dans les lignées cellulaires de glioblastome U251, T98G et LN229, avec des niveaux de protéines GRP78 et CHOP étonnamment augmentés. L'Atazanavir provoque une augmentation proéminente des protéines polyubiquitinylées de différentes tailles dans les cellules de glioblastome U251. [3] L'Atazanavir inhibe également le protéasome humain 20S avec une IC50 de 26 μM. L'Atazanavir (30 μM) modifie l'ampleur du stress du RE et de l'expression des gènes UPR dans les cellules HepG2. [4] L'Atazanavir (30 mM) provoque une augmentation de 2.5 fois de l'expression de la P-gp immunoréactive avec une diminution du Rh123 intracellulaire dans les cellules LS180V. [5]

• Tests de protéase

  Pour déterminer les constantes d'inhibition (Ki) pour chaque inhibiteur de Prt, la Prt de type sauvage HIV-1 RF purifiée (2.5 nM) est incubée à 37 ℃ avec un substrat fluorogène de 1 μM à 15 μM dans un tampon de réaction (1 M NaCl, 1 mM EDTA, 0.1 M acétate de sodium [pH 5.5], 0.1% polyéthylène glycol 8000) en présence ou en absence d'Atazanavir. Le clivage du substrat est quantifié en mesurant une augmentation de l'émission fluorescente à 490 nM après excitation à 340 nM à l'aide d'un Cytofluor 4000. Les réactions sont effectuées en utilisant 1.36 μM, 1.66 μM, 2.1 μM, 3.0 μM, 5.0 μM ou 15 μM de substrat en présence de cinq concentrations d'Atazanavir (1.25 nM à 25 nM). Le clivage du substrat est surveillé à intervalles de 5 minutes pendant 30 minutes. Les taux de clivage sont ensuite déterminés pour chaque échantillon aux premiers points temporels de la réaction, et les valeurs de Ki sont déterminées à partir des pentes des courbes de Michaelis-Menten résultantes.

• Lignées cellulaires

  RF/MT-2 strains

• Concentrations

  15 nM

• Temps dincubation

  6 days

• Méthode

  To determine cytotoxicity, host cells are incubated in the presence of serially diluted Atazanavir for 6 days and cell viability is quantitated using an XTT[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl-2H-tetrazolium-5-carboxanilide] assay to calculate the 50% cytotoxic concentrations (CC50s). To assess the effect of human serum proteins on antiviral activity, the 10% fetal calf serum normally used for assays is replaced with 40% adult human serum or 1 mg of α1-acid glycoprotein/mL.