AZD7762

AZD7762, un inhibiteur plus sélectif de Chk1, inhibe la phosphorylation de Chk1 d'un peptide cdc25C en se liant de manière réversible au site de liaison de l'ATP de Chk1, avec une IC50 de 5 nM et un K_i de 3,6 nM. Ce composé induit un arrêt cellulaire avec une EC50 de 0,620 µM, et abroge significativement l'arrêt en G2 induit par la camptothécine avec une EC50 de 10 nM, en bloquant la dégradation dépendante de Chk1 de Cdc25A et l'activation de la Cyclin A. Il (300 nM) améliore l'efficacité antitumorale contre SW620 et contre MDA-MB-231 en réduisant les valeurs de GI50 de 24,1 nM et 2,25 µM à respectivement 1,08 nM et 0,15 µM. [1] Ce produit chimique montre une cytotoxicité contre une variété de lignées cellulaires de neuroblastome portant le p53 de type sauvage, la mutation p53, l'amplification de Mdm2 ou la délétion de p14 avec des valeurs d'IC50 allant de 82,6 à 505,9 nM. [2]

AZD7762 seul à 25 mg/kg montre peu d'activité antitumorale chez les souris xénogreffées H460-DNp53 et SW620, mais lorsqu'il est administré en combinaison, ce composé montre une efficacité antitumorale significative chez les deux souris xénogreffées avec une destruction logarithmique des cellules de 0,9 ou un pourcentage traité/contrôle (%T/C) de 26 même à faible dose de 12,5 mg. L'administration de ce produit chimique en combinaison chez le rat xénogreffé H460-DNp53 inhibe le volume tumoral de manière dose-dépendante avec des valeurs de %T/C de 48 et 32 pour respectivement 10 et 20 mg/kg. Ce composé (25 mg/kg) en combinaison provoque une régression tumorale complète chez les souris xénogreffées SW620, le %T/C augmentant significativement à respectivement -66% et -67%. [1]

• Essai Chk1 Kinase

  La Chk1 humaine recombinante est exprimée sous forme de fusion S-transférase dans des cellules d'insectes à l'aide d'un vecteur baculovirus et purifiée par chromatographie d'affinité. Un substrat peptidique synthétique (N-biotinylaminohexanoyl-KKVSRSGLYRSPMPENLNRPR) pour Chk1 est synthétisé. Les concentrations finales d'essai du peptide et de l'ATP (froid + 40 nCi [³³P]ATP) sont respectivement de 0,8 et 1 µM. Différentes concentrations de ce composé, de tampon contenant du peptide et de la Chk1 kinase et de l'ATP, sont ajoutées séquentiellement à une plaque d'essai à 384 puits. La plaque est incubée pendant 2 heures, la réaction est arrêtée par l'ajout de tampon contenant de l'EDTA et des billes de test de proximité par scintillation, et les plaques sont lues à l'aide d'un lecteur TopCount. L'analyse des données est effectuée pour déterminer une courbe dose-réponse (IC50).

• Lignées cellulaires

  HT29, SW620 and MDA-MB-231 cells

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentration ~12.5 μM

• Temps dincubation

  20 or 48 hours

• Méthode

  For the checkpoint abrogation assay, HT29 cells are treated for 2 hours with camptothecin (topoisomerase I inhibitor; 0.07 μg/mL) to induce the G2 checkpoint. Cells are then treated for 20 hours with a 12-point titration of AZD7762 (12.5 μM to 6 nM) plus nocodazole. Cells are fixed with 3.7% formaldehyde for 1 hour, permeabilized with PBS containing 0.05% Triton X, and incubated with anti-phH3 antibody for 1 hour followed by Alexa Fluor 488 anti-rabbit and Hoechst stain for 1 hour. Mitotic index is determined on the ArrayScan and expressed as the percentage of cells undergoing mitosis. For the potentiation assays, SW620 or MDA-MB-231 cells are dosed for 24 hours with a 9-point titration of ranging from 0.01 to 100 nM with a constant dose of this compound (300 nM). After 24 hours, medium is removed and this chemical alone is added back to the wells for an additional 24 hours. Cells are then incubated in this compound-free medium for an additional 72 hours. The effect on cell proliferation is determined by MTT.

• Modèles animaux

  Male NCr mice implanted s.c. with H460-DNp53 cells or SW620, and male rnu rats implanted s.c. with H460-DNp53 cells

• Dosages

  ~25 mg/kg

• Administration

  Injection i.v.