3-Methyladenine (3-MA)

La légère préférence du 3-Methyladenine (3-MA) pour la prévention de Vps34 provient probablement d'un anneau hydrophobe spécifique à Vps34, qui encercle le groupe 3-méthyle de ce composé. [1] Il a été rapporté qu'il provoque la mort des cellules cancéreuses dans des conditions normales et de famine, et qu'il pourrait également supprimer la migration et l'invasion cellulaires indépendamment de sa capacité à inhiber Autophagy, ce qui implique qu'il possède des fonctions autres que la suppression de l'Autophagy. Ce composé provoque une mort cellulaire dépendante des caspases, indépendamment de l'inhibition de l'Autophagy. Le traitement avec 5 mM de celui-ci réduit le pourcentage de cellules HeLa privées de glucose présentant des points GFP-LC3 à 23%. Les niveaux de LC3-I augmentent et les niveaux de LC3-II diminuent entre 12 et 48 heures dans les cellules traitées avec 3-MA. La conversion de LC3-I en LC3-II est supprimée par le composé. Le traitement des cellules HeLa avec 2,5 mM ou 5 mM pendant un jour n'affecte pas la viabilité cellulaire, tandis que le traitement avec 10 mM pendant un jour entraîne une diminution de 25,0% de la viabilité cellulaire. Le traitement des cellules avec 2,5, 5 ou 10 mM pendant deux jours entraîne une diminution de 11,5%, 38,0% et 79,4% de la viabilité, respectivement. Il diminue la viabilité cellulaire de manière dépendante du temps et de la dose, et raccourcit significativement la durée de l'arrêt prométaphase induit par le nocodazole. [2] La suppression de l'Autophagy par 3-MA inhibe la mort cellulaire induite par SU11274. [3] Un traitement prolongé avec celui-ci (jusqu'à 9 heures) induit une conversion significative de LC3 I en II dans les MEF de type sauvage. Un traitement prolongé avec 3-MA, mais pas la wortmannine, augmente nettement la ponctuation/agrégation de GFP-LC3. Sa conversion de LC3 induite et la libération de GFP libre sont dépendantes d'ATG7. Le traitement avec celui-ci entraîne une augmentation évidente du niveau de protéine p62. Le composé augmente le niveau de p62 même dans les MEF Atg5−/− ainsi que dans les cellules avec délétion d'ATG5 médiatisée par la DOX. Il inhibe la PI3K de classe I et de classe III selon des schémas temporels différents. Sa conversion induite de LC3 I en LC3 II est considérablement compromise dans les cellules Tsc2−/− par rapport aux cellules de type sauvage. Ce composé perturbe la fonction anti-autophagique du complexe mTOR 1. [4]

Le 3-Methyladenine (3-MA) bloque l'Autophagy par son effet sur la phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) de classe III. Le traitement avec ce composé n'altère pas le degré d'hémorragie par rapport au groupe hémorragie sous-arachnoïdienne (SAH). Son prétraitement aggrave significativement les symptômes neurologiques par rapport au groupe SAH + véhicule. L'Autophagy est diminuée lors de son application. Inversement, la caspase-3 clivée est nettement régulée à la hausse dans le groupe SAH + 3-MA. Conformément à la régulation à la hausse de l'expression de la caspase-3 clivée, le nombre de cellules TUNEL-positives dans le cortex droit est significativement augmenté dans le groupe SAH + 3-MA par rapport au groupe SAH + véhicule. [5]

• Essai de dégradation des protéines

  Les cellules HeLa sont radiomarquées pendant 24 heures avec 0,05 mCi/mL de l-[U- ¹⁴C]valine. À la fin de la période de marquage, les cellules sont rincées trois fois avec du PBS. Les cellules sont incubées pendant les temps désignés dans un milieu complet ou EBSS avec ou sans la présence de 10 mM de 3-Methyladenine (3-MA).

• Lignées cellulaires

  HeLa cell line

• Concentrations

  1-10 mM

• Temps dincubation

  24, 48 or 72 hours

• Méthode

  After treatment with 3-Methyladenine (3-MA), cell (such as HeLa cell) viability is determined by a trypan blue exclusion assay. Briefly, both adherent and floating cells are collected and suspended in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.4) at a final density of 1-2 × 10⁶/mL. An equal volume of 0.4% trypan blue solution (w/v, in PBS) is added to the cell suspension and mixed thoroughly. After incubation at room temperature for 3 min, cell counting is performed using a hemacytometer.

• Modèles animaux

  Adult male Sprague–Dawley rats weighing 300-350 g

• Dosages

  400 nM

• Administration

  Intracerebral ventricular