Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilized powder

Comparaison de produits

Description

Le Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilisé (3X DYKDDDDK Tag Peptide) est un polypeptide composé de 23 acides aminés dun poids moléculaire de 2864 Da, qui peut se lier à lanticorps Anti-DYKDDDDK Tag par compétition, de sorte que lanticorps lié à lanticorps Anti-DYKDDDDK Tag peut être élué lors de limmunoprécipitation de la protéine de fusion DYKDDDDK Tag. Le motif Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp dans le polypeptide est répété trois fois, et les 8 acides aminés à lextrémité carboxy constituent le DYKDDDDK Tag classique (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).

Propriétés

Application

Pour une élution compétitive des protéines de fusion DYKDDDDK de lanticorps monoclonal ANTI-DYKDDDDK Tag en solution ou lié à lagarose sur les billes Anti-DYKDDDDK.

Attention

1. Lisez attentivement le manuel dutilisation avant la première utilisation;

2. Évitez la congélation, le séchage et la centrifugation à grande vitesse pendant lutilisation et le stockage des billes;

3. Ce produit est destiné uniquement à la R&D, pas à un usage médicamenteux, domestique ou autre. Veuillez consulter la fiche de données de sécurité pour des informations concernant les dangers et les pratiques de manipulation sécuritaires.

Procédure

Élution peptidique de la protéine de fusion DYKDDDDK à partir des billes Anti-DYKDDDDK

1. Suspendez soigneusement le gel daffinité Anti-DYKDDDDK Tag dans le flacon, pour une suspension uniforme de la résine. Transférez rapidement 10 μl de la suspension de gel (environ 5 μl de volume de gel tassé) dans un nouveau tube.

2. Ajoutez 0,6 mL de TBS. Suspendez soigneusement le gel daffinité Anti-DYKDDDDK Tag par pipetage. Centrifugez la résine à 5000 tr/min pendant 30 secondes et retirez délicatement le surnageant. Assurez-vous de retirer tout le tampon de lavage sans jeter la résine. Répétez 3-4 fois.

3. Ajoutez 500 μL dextraits périplasmiques cellulaires à la résine lavée.

4. Agitez doucement les échantillons pendant 2 heures à 4°C.

5. Centrifugez la résine pendant 30 secondes à 5000 tr/min. Transférez les surnageants dans un nouveau tube.

6. Lavez la résine avec 0,5 mL de TBS jusquà ce que la DO280 du surnageant soit <0,05.

7. Élution de la protéine de fusion DYKDDDDK par compétition avec le peptide Poly DYKDDDDK. Éluez la protéine de fusion DYKDDDDK liée par élution compétitive avec cinq aliquotes dun volume de colonne dune solution contenant 200-400 ug/mL de peptide Poly DYKDDDDK dans du TBS.

8. Recyclage des billes Anti-DYKDDDDK
Le peptide Poly DYKDDDDK peut ne pas éluer la totalité de la protéine de fusion DYKDDDDK liée aux billes Anti-DYKDDDDK. Il est recommandé de régénérer les billes Anti-DYKDDDDK immédiatement après utilisation en les lavant avec trois aliquotes de 5 mL de glycine HCl 0,1 M, pH 3,5. Le gel doit être immédiatement rééquilibré dans du TBS jusquà ce que leffluent ait un pH neutre.

Remarque : Ne laissez pas les billes Anti-DYKDDDDK dans la glycine HCl plus de 20 minutes.
9. Stockage des billes Anti-DYKDDDDK Lavez les billes Anti-DYKDDDDK trois fois avec 5 mL de glycérol à 50% avec 10 mM de phosphate de sodium, 150 mM de chlorure de sodium, pH 7,4, contenant 0,02% (p/v) dazide de sodium. Ajoutez ensuite 5 mL supplémentaires de glycérol à 50% avec 10 mM de phosphate de sodium, 150 mM de chlorure de sodium, pH 7,4, contenant 0,02% (p/v) dazide de sodium et stockez à -20°C sans égoutter.

Stockage (à partir de la date de réception)

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