Home Cell Cycle Chk Remmer CHIR-124

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

CHIR-124 Chk Remmer

Cat.Nr.: S2683

CHIR-124 is een nieuwe en krachtige Chk1-remmer met een IC50 van 0,3 nM in een celvrije test. Het vertoont een 2.000-voudige selectiviteit tegen Chk2, en een 500- tot 5.000-voudig lagere activiteit tegen CDK2/4 en Cdc2.
CHIR-124 Chk Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 419.91

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.48%
99.48

Celkweek, behandeling & werkconcentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells, EC50=0.08 μM
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells in presence of camptothecin
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 419.91 Formule

C23H22ClN5O

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 405168-58-3 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1CN2CCC1C(C2)NC3=C(C(=O)NC4=C3C=C(C=C4)Cl)C5=NC6=CC=CC=C6N5

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : Insoluble
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Chk1
(Cell-free assay)
0.3 nM
FLT3
(Cell-free assay)
5.8 nM
PDGFR
(Cell-free assay)
6.6 nM
GSK-3
(Cell-free assay)
23.3 nM
In vitro

CHIR-124 is een op chinolon gebaseerd klein molecuul dat structureel niet verwant is aan andere bekende remmers van Chk1. Deze verbinding interageert synergetisch met topoisomerase-vergiften (bijv. Camptothecin of SN-38) bij het veroorzaken van groeiremming in een verscheidenheid aan kankercellijnen, waaronder borstcarcinoom (MDA-MB-231 en MDA-MB-435) en coloncarcinoom (SW-620 en Colo205), die allemaal het gemuteerde p53-gen bevatten. Het heft de door SN-38 geïnduceerde S- en G2-M-checkpoints op en bevordert apoptose in MDA-MD-435 borstkankercellen. De opheffing van het G2-M-checkpoint en de inductie van apoptose door deze chemische stof worden versterkt door het verlies van p53. Deze verbinding richt zich ook krachtig op andere kinasen zoals PDGFR en Flt3 met IC50-waarden van respectievelijk 6,6 nM en 5,8 nM.

Kinase Assay
Chk1-test
Voor de Chk1-assay wordt het kinase-domein tot expressie gebracht in Sf9-insectencellen en wordt een gebiotinyleerd cdc25c-peptide dat de consensus Chk1/Chk2-fosforyleringsplaats (*)(biotin-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]) bevat, gebruikt als substraat. Een verdunningsreeks van CHIR-124 wordt gemengd met een kinase-reactiebuffer met een eindconcentratie van 30 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM β-glycerofosfaat, 5 mM MnCl2, 0,01% runderserumalbumine, 1,35 nM CHK1 kinase-domein, 0,5 μM peptidesubstraat en 1 AM niet-gelabeld ATP, plus 5 nM 33Pγ-gelabeld ATP (specifieke activiteit = 2.000 Ci/mmol). Reacties en detectie van de fosfaatoverdracht worden uitgevoerd door middel van een radioactieve methode. Reacties worden gedurende 1 tot 4 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd en het gefosforyleerde peptide wordt opgevangen op met streptavidine gecoate microtiterplaten die stop-reactiebuffer bevatten (25 mM EDTA [ethyleendiaminetetraazijnzuur], 50 mM HEPES, pH 7,5). Het gefosforyleerde peptide wordt gemeten met het DELFIA TRF-systeem met behulp van een met europium gelabeld anti-fosfotyrosine-antilichaam PT66. De concentratie van deze verbinding voor IC50 wordt berekend met behulp van niet-lineaire regressie met XL-Fit data-analysesoftware.
In vivo

CHIR-124 versterkt de groeiremmende effecten door het G2-M checkpoint op te heffen en de tumorapoptose te verhogen in een orthotopisch borstkanker-xenograftmodel.
Referenties