Home PI3K/Akt/mTOR PDK Remmer BX-912

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

BX-912 PDK Remmer

Cat.Nr.: S1275

BX912 is een potente en specifieke PDK1-remmer met een IC50 van 12 nM, respectievelijk 9- en 105-voudig selectiever voor PDK1 dan PKA en PKC in celvrije assays. In vergelijking met GSK3β is de selectiviteit voor PDK1 600-voudig.
BX-912 PDK Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 471.35

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: S127501 DMSO]94 mg/mL]false]Ethanol]94 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.8%
99.8

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 471.35 Formule

C20H23BrN8O

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 702674-56-4 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1CCN(C1)C(=O)NC2=CC=CC(=C2)NC3=NC=C(C(=N3)NCCC4=CN=CN4)Br

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 94 mg/mL (199.42 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 94 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PDK-1
(Cell-free assay)
12 nM
PKA
(Cell-free assay)
110 nM
KDR
(Cell-free assay)
410 nM
CDK2/CyclinE
(Cell-free assay)
650 nM
Chk1
(Cell-free assay)
830 nM
c-Kit
(Cell-free assay)
850 nM
In vitro
BX912 voorkomt ChcK1, PKA, c-kit en KDR met een IC50 van respectievelijk 0,83, 0,11, 0,85 en 0,41 μM. BX912 blokkeert PDK1/Akt-signalering in tumorcellen en onderdrukt de verankerafhankelijke groei van een verscheidenheid aan tumorcellijnen (zoals PC-3-cellen) in kweek of induceert apoptose. Een aantal kankercellijnen (zoals MDA-468 borstkanker) met verhoogde Akt-activiteit zijn >30-voudig gevoeliger voor groeiremming door PDK1-remmer BX912 in zachte agar dan op weefselkweekplastic, wat consistent is met de celfunctie van het PDK1/Akt-signaleringspad, dat bijzonder belangrijk is voor niet-gehechte cellen. BX912 blokkeert krachtig de PDK1-enzymactiviteit in een directe kinase-assay, hoewel BX912 er niet in slaagt om de pre-geactiveerde AKT2-activiteit te blokkeren (IC50 > 10 μM). Daarom is BX-912 een directe remmer van PDK1. BX912 is een competitieve remmer van PDK1-activiteit met betrekking tot zijn substraat, ATP, wat suggereert dat BX912 bindt aan de ATP-bindende pocket van PDK1. De aminopyrimidinestructuur van BX912 neemt een vergelijkbare oriëntatie aan in het actieve centrum van PDK1. BX912 bevordert een uitgesproken toename in de populatie van MDA-468-cellen met 4N DNA-gehalte, wat wijst op een blokkade in de G2/M-fase van de celcyclus. BX912 remt ook krachtig de groei van HCT-116-cellen in zachte agar, met een remmend effect van 96% bij een dosis van 1 μM. BX912 remt krachtig de groei van PC-3-cellen in zachte agar, met een IC50 van 0,32 μM.
Kinase Assay
Kinase-assays
PDK1 wordt getest in een directe kinase-assay en een gekoppelde assay die de PDK1- en PtdIns-3,4-P2-gemedieerde activering van AKT2 meet. Voor de gekoppelde assay bevatte het uiteindelijke assaymengsel (60 μL): 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL bovien serumalbumine, 18 mM β-glycerolfosfaat, 0,7 mM dithiothreitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 μM ATP, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 7,5 μM gebiotinyleerd peptidesubstraat (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 μL PtdIns-3,4-P2-houdende fosfolipidevesikels, 60 pg gezuiverd recombinant humaan PDK1, en 172 ng gezuiverd recombinant humaan AKT2. Na incubatie gedurende 2 uur bij kamertemperatuur wordt het biotine-gelabelde peptide uit 10 μL van het assaymengsel op streptavidine-gecoate SPA-kralen opgevangen, en wordt de productvorming gemeten door scintillatieproximiteit in een Wallac MicroBeta-teller. Het gevormde product is evenredig met de incubatietijd en met de hoeveelheid toegevoegd PDK1 en inactief AKT2. PDK1 wordt in suboptimale hoeveelheden toegevoegd, zodat de assay gevoelig remmers van AKT2-activering kon detecteren, evenals de directe remmer BX912 van PDK1 of AKT2. Om de PDK1-activiteit direct te meten, bevatte het uiteindelijke assaymengsel (60 μL) 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% β-mercapto-ethanol, 1 mg/mL bovien serumalbumine, 10 mM MgOAc, 10 μM ATP, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 7,5 μM substraatpeptide (H2N-ARRRGVTTKTFCGT), en 60 ng gezuiverd recombinant humaan PDK1. Na 4 uur bij kamertemperatuur wordt 25 mM EDTA toegevoegd en wordt een deel van het reactiemengsel op P81-fosfocellulosepapier gespot. Het filtreerpapier wordt driemaal gewassen met 0,75% fosforzuur en eenmaal met aceton. Na drogen wordt het op het filter gebonden gelabelde peptide gekwantificeerd met behulp van een fosforimager.
Referenties