Home Protein Tyrosine Kinase EGFR Remmer Pelitinib (EKB-569)

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

Pelitinib (EKB-569) EGFR Remmer

Cat.Nr.: S1392

Pelitinib (EKB-569) is een krachtige irreversibele EGFR-remmer met een IC50 van 38,5 nM. Deze verbinding remt ook lichtjes Src, MEK/ERK en ErbB2 met IC50's van respectievelijk 282 nM, 800 nM en 1255 nM. Fase 2.
Pelitinib (EKB-569) EGFR Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 467.92

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.49%
99.49

Celkweek, behandeling & werkconcentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
A431 Function assay Inhibition of EGFR autophosphorylation in human A431 cells, IC50=0.00802μM. 20797871
Sf9 Function assay 10 mins Inhibition of recombinant human His6-tagged EGFR cytoplasmic domain (645 to 1186 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in autophosphorylation preincubated for 10 mins followed by ATP-MgCl2 addition and measured, IC50=0.0385μM. 30600149
A431 Function assay 90 mins Inhibition of EGFR in human A431 cells assessed as reduction in EGF-stimulated EGFR autophosphorylation preincuabted for 90 mins followed by EGF-stimulation by sandwich-ELISA, IC50=0.039μM. 30973735
DiFi Function assay 2 hrs Inhibition autophosphorylation of EGFR in human DiFi cells after 2 hrs by ELISA, IC50=0.07943μM. 17689836
UCH1 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH1 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=0.09μM. 30973735
UCH2 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human UCH2 cells measured after 72 hrs by alamar blue assay, IC50=1.6μM. 30973735
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 467.92 Formule

C24H23ClFN5O2

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 257933-82-7 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCOC1=C(C=C2C(=C1)N=CC(=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)C#N)NC(=O)C=CCN(C)C

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 13 mg/mL (27.78 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Kenmerken
An improved version of EKI-785.
Targets/IC50/Ki
EGFR
38.5 nM
Src
282 nM
MEK/ERK
800 nM
ErbB2
1.255 μM
Raf
3.353 μM
In vitro
Pelitinib (EKB-569) vertoont een veel hogere remmende activiteit tegen EGFR, vergeleken met het nauw verwante c-erbB-2, evenals andere kinasen zoals Src, Cdk4, c-Met, Raf en MEK/ERK, met een IC50 variërend van 282 nM voor Src tot >20 μM voor Cdk4. Consistent daarmee remt deze verbinding de autofosforylering van EGFR significant, maar niet c-Met in A431-cellen. Het remt potent de proliferatie van normale menselijke keratinocyten (NHEK), evenals A431 en MDA-468 tumorcellen met een IC50 van respectievelijk 61 nM, 125 nM en 260 nM, terwijl het weinig activiteit vertoont tegen MCF-7-cellen met een IC50 van 3,6 μM. Deze chemische stof remt EGF-geïnduceerde fosforylering van EGFR in A431- en NHEK-cellen met een IC50 van 20-80 nM, evenals de fosforylering van STAT3 met een IC50 van 30-70 nM. Bij 75-500 nM remt het ook specifiek de activering van AKT en ERK1/2, zonder het NF-κB-pad te beïnvloeden. In NHEK-cellen remt deze verbinding ook potent TGF-α-gemedieerde EGFR-activering met een IC50 van 56 nM, evenals activering van STAT3 en ERK1/2 met een IC50 van respectievelijk 60 nM en 62 nM.
Kinase Assay
Autofosforylering van EGFR in cellen
Voor experimenten met cellen in kweek worden A431-cellen 2,75 uur behandeld met verschillende concentraties Pelitinib (EKB-569) voordat ze 0,25 uur samen geïncubeerd worden met 100 ng/mL EGF. Cellen worden tweemaal gewassen met koude fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) voordat ze worden toegevoegd aan lysisbuffer (10 mM Tris, pH 7,5, 5 mM ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA), 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 1% natriumdeoxycholaat, 0,1% SDS, 1 mM PMSF, 10 mg/mL pepstatine A, 10 mg/mL leupeptine, 20 KIU/mL aprotinine, 2 mM natriumorthovanadaat en 100 mM natriumfluoride) gedurende 20 minuten op ijs, vóór immunoprecipitatie en SDS-PAGE-immunoblotting. Voor immunoprecipitatie worden gekweekte cellen in koude lysisbuffer geplaatst en onmiddellijk op ijs gehomogeniseerd met een polytron met verschillende pulsen. Het homogenaat wordt eerst gecentrifugeerd bij 2500 tpm (20 minuten, 4 °C) en vervolgens opnieuw bij 14.000 tpm in een microcentrifuge (10 minuten, 4 °C). Supernatanten (1000 μg eiwit) worden 2 uur bij 4 °C geïncubeerd met 15 ml EGFR polyklonale antilichaam. Na 2 uur wordt 50 μL proteïne G plus/proteïne A agarose kralen toegevoegd en geïncubeerd met constante rotatie gedurende 2 uur bij 4 °C. Na wassen met lysisbuffer worden de kralen gedurende 2 minuten gekookt in Laemmli-monsterbuffer. Eiwitten worden vervolgens gescheiden met SDS-PAGE, overgebracht naar een immobilonmembraan en 's nachts geprobeerd met een anti-fosfotyrosine antilichaam geconjugeerd met mierikswortelperoxidase (HRP). Membranen worden ontwikkeld met behulp van het ECL-reagens. Totaal EGFR-eiwit wordt bepaald door membranen te strippen en opnieuw te proben met receptorspecifieke antilichamen. Kwantificering van banden gebeurt door densitometrie, met behulp van ImageQuant-software met een Molecular Dynamics laserdoorschijningsscanner.
In vivo
Een enkele orale dosis van 10 mg/kg Pelitinib (EKB-569) remt de EGFR-fosforylering in A431-xenografts met over-expressie van EGFR potent, met 90% binnen 1 uur en met >50% na 24 uur. Toediening van deze verbinding bij 20 mg/kg/dag remt tumorigenese in APCMin/+-muizen met 87%, wat gelijk is aan het effect van EKI-785 in 2 keer de doses (40 mg/kg/dag), consistent met een grotere in vivo potentie. Deze chemische stof remt selectief EGFR-signalering in luchtwegepitheelcellen in vivo. In het muismodel van luchtwegepitheelremodellering dat induceerbaar is door virale infectie en een vertraagde maar permanente overgang naar bekercelmetaplasie kenmerkt, corrigeert deze verbinding behandeling bij 20 mg/kg/dag alle 3 aspecten van epitheliale remodellering, door de toename van trilhaarcellen en de afname van Clara-cellen volledig te blokkeren, en de metaplasie van bekercellen significant te remmen.
Referenties