Home PI3K/Akt/mTOR PKA Remmer H-89 Dihydrochloride

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

H-89 Dihydrochloride PKA Remmer

Cat.Nr.: S1582

H 89 2HCl is een krachtige PKA-remmer met een Ki van 48 nM in een celvrije test, 10-voudig selectiever voor PKA dan PKG, 500-voudig grotere selectiviteit dan PKC, MLCK, calmodulinekinase II en caseïnekinase I/II. H 89 2HCl induceert autophagy.
H-89 Dihydrochloride PKA Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 519.28

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.48%
99.48

Celkweek, behandeling & werkconcentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
CHO  Growth Inhibition Assay 10 μM 1 h inhibits 5-HT induced cAMP production decrease 12569069
SK-N-MC Function Assay 30 μM 24 h DMSO reduces the down-regulation of β1-AR by isoproterenol by 50%  11705454
Sf9 Function assay Inhibition of His-tagged human MSK1 expressed in Sf9 cells, IC50 = 0.12 μM. 10998351
Sf9 Function assay Inhibition of rat ROCK2 expressed in Sf9 cells, IC50 = 0.27 μM. 10998351
SF9 Function assay Inhibition of human PKBalpha expressed in SF9 cells, IC50 = 2.6 μM. 10998351
OVCAR8 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human OVCAR8 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 10.5 μM. 24508830
OVCAR8 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human OVCAR8 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 10.5 μM. 24389511
HL60 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human HL60 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 11.4 μM. 24389511
PC3M Function assay Inhibition of GSK3-beta in human PC3M cells by ELISA, IC50 = 15 μM. 18345609
U87MG Growth inhibition assay Growth inhibition of human U87MG cells by SRB assay, IC50 = 15 μM. 18345609
U87MG Antiproliferative assay 96 hrs Antiproliferative activity against human U87MG cells after 96 hrs by SRB assay, IC50 = 15 μM. 20151677
HCT116 Cytotoxicity assay 72 hrs Cytotoxicity against human HCT116 cells assessed as growth inhibition after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 15.7 μM. 24508830
HCT116 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50 = 15.7 μM. 24389511
PC3M Function assay 96 hrs Inhibition of PC3M cells by SRB assay after 96 hrs, GI50 = 18 μM. 17451235
PC3M Growth inhibition assay Growth inhibition of human PC3M cells by SRB assay, IC50 = 18 μM. 18345609
LS174T Function assay 20 uM 6 hrs Inhibition of PGE2-stimulated TCF/LEF transactivation in human LS174T cells at 20 uM measured after 6 hrs by dual luciferase reporter gene assay 27736063
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 519.28 Formule

C20H20BrN3O2S.2HCl

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 130964-39-5 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1=CC2=C(C=CN=C2)C(=C1)S(=O)(=O)NCCNCC=CC3=CC=C(C=C3)Br.Cl.Cl

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (192.57 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : 10 mg/mL

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PKA
(Cell-free assay)
48 nM(Ki)
S6K1
(Cell-free assay)
80 nM
PKG
(Cell-free assay)
0.48 μM(Ki)
In vitro

H89 2HCl is een krachtige PKA (cAMP-afhankelijke) proteïnekinase A-remmer met een Ki van 48 nM, vertoont een 10-voudige selectiviteit over PKG, vertoont een >500-voudige selectiviteit over PKC, MLCK, calmodulinekinase II en caseïnekinase I/II. Voorbehandeling van de cellen met deze verbinding (30 μM) 1 uur vóór de toevoeging van forskoline remt de forskoline-geïnduceerde eiwitfosforylering significant op een dosisafhankelijke manier. Deze verbinding remt ook verschillende andere kinasen met IC50 van 80, 120, 135, 270, 2600 en 2800 nM voor S6K1, MSK1, PKA, ROCKII, PKBα en MAPKAP-K1b, respectievelijk. Het heeft ook activiteit bij sommige cellulaire receptoren en ionkanalen, waaronder Kv1.3 K+ kanalen, β1AR en β2AR.

Kinase Assay
PKA enzymactiviteit
De cAMP-afhankelijke proteïnekinase-activiteit wordt geanalyseerd in een reactiemengsel dat, in een eindvolume van 0,2 ml, 50 mM Tris-HCl (pH 7,0), 10 mM magnesiumacetaat, 2 mM EGTA, 1 μM cAMP of afwezigheid van cAMP, 3,3-20 μM [γ-32P]ATP (4 × 105 cpm), 0,5 μg van het enzym, 100 μg histone H2B en elke verbinding, zoals aangegeven, bevat.
In vivo

H89 veroorzaakt duidelijke modificaties van eiwitfosforylering, met de meest robuuste veranderingen in fosforylering zijn fructose-1,6-bifosfatase, heterogeen nucleair ribonucleoproteïne (hnRNP), NSFL1 cofactor p47, die allemaal potentieel regulerende verbindingen hebben met cAMP/PKA.

Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18523239/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16687476/

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot p-eNOS / T-eNOS / p-PKA p-GPIbβ / GPIbβ / p-BAD p-S6K1 / p-rpS6 / p-GSK3β
S1582-WB2
31035633
Immunofluorescence p-eNOS / eNOS iNOS / NFκB p65 myopodin
S1582-IF3
30513637