Home Immunology & Inflammation ROS Activator Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS activator

Cat.Nr.S7873

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate (D-α-Hydroxyglutaric acid disodium) is een competitieve inhibitor van α-ketoglutaraat-afhankelijke dioxygenases met Ki van 10,87 ± 1,85 mM.
Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS Activator Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 192.08

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.74%
99.74

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 192.08 Formule

C5H6Na2O5

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 103404-90-6 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen D-α-Hydroxyglutaric acid disodium Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase
In vitro
In U-87MG-cellen fungeert (R)-2-Hydroxyglutarate als een zwakke antagonist van α-KG om α-KG-afhankelijke histondemethylasen te remmen en verhoogt dimethylering op zowel H3K9 als H3K79. Bovendien remt (R)-2-Hydroxyglutarate de ATP-synthase en mTOR-signalering, en veroorzaakt zo groeiremming en het doden van tumorcellen.
Kinase Assay
Enzymatische Assays
Om de humane JHDM1A/KDM2A-demethylaseactiviteit ten opzichte van H3K36me2 te bepalen, wordt His-gelabelde JHDM1A eerst verkregen door pET28a-JHDM1A te transformeren in Escherichia coli BL21 en wordt de eiwitexpressie geïnduceerd door toevoeging van 1 mM IPTG bij 30° C wanneer de celdichtheid 0,5 OD600 eenheden bereikt. Cellen worden gelyseerd door sonificatie en Ni-NTA-agarose wordt gebruikt om His-JHDM1A-fusie-eiwitten te zuiveren. Histondemethylase-assay wordt uitgevoerd door 2 μg oligonucleosomen, 4 μg gezuiverd His-JHDM1A, en/of 10–50 mM L- of D-2-HG te incuberen in histondemethylatiebuffer [50 mM HEPES (pH 8,0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0,1–0,5 mM α-KG, 2 mM ascorbaat] bij 37° C gedurende 2–3 uur en de reacties worden gestopt door de toevoeging van SDS-laadbuffer en vervolgens geanalyseerd door western blotting met anti-H3K36me2-antilichaam. Om de CeKDM7A-demethylaseactiviteit ten opzichte van H3K9me2 en H3K27me2 te meten, worden twee synthetische gedi-methyleerde peptiden H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] en H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS] gebruikt als substraten. Demethylase-assays worden uitgevoerd in aanwezigheid van 10 μg enzym, 1 μg peptide in 20 μl buffer 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)22, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF gedurende 3 uur. Het demethylatiereactiemengsel wordt ontzout door door een C18 ZipTip te leiden. Om het remmende effect van 2-HG te onderzoeken, worden verschillende concentraties van 2-HG kort geïncubeerd met KDM7A voordat andere reactiemengsels worden toegevoegd. De monsters worden geanalyseerd met een MALDI-TOF/TOF-massaspectrometer.
Referenties