Home Cell Cycle Aurora Kinase Remmer Hesperadin

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

Hesperadin Aurora B remmer

Cat.Nr.S1529

Hesperadin remt Aurora B potent met een IC50 van 250 nM in een celvrije assay. Het vermindert de activiteit van AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK aanzienlijk, terwijl het de MKK1-activiteit in vivo niet remt.
Hesperadin Aurora Kinase Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 516.65

Ga naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.09%
99.09

Celkweek, behandeling & werkconcentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Moleculair gewicht 516.65 Formule

C29H32N4O3S

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 422513-13-1 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin remt het vermogen van geïmmunoprecipiteerde Aurora B om histone H3 te fosforyleren met een IC50 van 250 nM en vermindert de activiteit van andere kinasen (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 en PHK) aanzienlijk bij een concentratie van 1 μM. Daarentegen is slechts 20-100 nM van deze verbinding voldoende om het verlies van mitotische histone H3-Ser10-fosforylering in HeLa-cellen te induceren. De behandeling ervan veroorzaakt defecten in mitose en cytokinese, wat leidt tot stilstand van de proliferatie van HeLa-cellen en polyploïdisatie, die specifiek kan worden toegeschreven aan de remming van de Aurora B-functie tijdens het proces van chromosoomaanhechting. Deze verbinding (100 nM) heft snel de mitotische stilstand op die wordt geïnduceerd door taxol of monastrol, maar niet door nocodazole. De behandeling met dit en nocodazole in HeLa-cellen heft de kinetochoorlokalisatie van BubR1 op en vermindert de intensiteit van Bub1 bij kinetochoren, wat suggereert dat Aurora B-functie vereist is voor efficiënte kinetochoorrecrutering van BubR1 en Bub1, wat op zijn beurt nodig kan zijn voor langdurige checkpoint-signalering. Het voorkomt de fosforylering van recombinant trypanosoom histone H3 door de T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) van pathogene Trypanosoma brucei met een IC50 van 40 nM in in vitro kinase-tests. Deze chemische stof remt de celgroei van gekweekte infectieuze bloedbaanvormen (BF) significant met een IC50 van 48 nM, en remt de celgroei van insectenstadium procyclische vormen (PF) slechts zwak met een IC50 van 550 nM.
Kinase Assay
De Aurora B kinase test
Voor de Aurora B kinase test worden HeLa-cellen gelyseerd in een buffer die 50 mM NaCl bevat. Het volledige celextract wordt gedurende 20 minuten bij 4 °C gecentrifugeerd met 13.000 tpm met behulp van een tafelcentrifuge. Het pellet dat wordt verkregen uit 200 mg volledig celextract wordt opnieuw geëxtraheerd in 15 ml lysisbuffer die 250 mM NaCl bevat om actieve Aurora B kinase te verkrijgen uit mitotisch chromatine. Het supernatant met lage snelheid van het laatste extract wordt gebruikt voor immunoprecipitatie. Monoklonaal muis anti–AIM-1, of muis anti-HA, wordt gekoppeld aan GammaBind Plus Sepharose, en de kralen worden gedurende 90 minuten bij 4 °C ondersteboven in het extract gedraaid. De kralen worden gewassen, gealiquoteerd en gewassen in kinasebuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF). De kinase test wordt uitgevoerd met 10 μL kralen in 20 μL kinasebuffer die 5 μg histone H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-32P]ATP, en verschillende concentraties van deze verbinding bevat gedurende 20 minuten bij 37 °C. SDS-monsterbuffer wordt toegevoegd, en monsters worden gekookt en gescheiden door SDS-PAGE. De gel wordt gedroogd en het radioactieve signaal wordt gedetecteerd door PhosphorImager-analyse. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van ImageQuant-software.
Referenties

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832