WAY-600

Catalogusnr.S2689 Batch:S268901

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₂₈H₃₀N₈O

Molecuulgewicht

494.59

CAS-nr.

1062159-35-6

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

WAY-600 is een krachtige, ATP-competitieve en selectieve remmer van mTOR met een IC50 van 9 nM; deze verbinding blokkeert mTORC1/P-S6K(T389) en mTORC2/P-AKT(S473) maar niet P-AKT(T308); het is selectief voor mTOR dan PI3Kα (>100-voudig) en PI3Kγ (>500-voudig).

Doelen

mTOR

9 nM

In vitro

Immuuncomplex kinase-assay toont aan dat het mTORC2-specifieke substraat His6-AKT of het mTORC1-substraat His6-S6K dosisafhankelijk wordt geremd door WAY-600. Deze verbinding remt globaal mTOR-signalering en AKT-functie in cellulaire modellen op een dosisafhankelijke manier. Het remt sterk de cap-afhankelijke en globale eiwitsynthese in MDA361, menselijke borstkankercellen. Deze chemische stof vertoont antiproliferatieve effecten in verschillende kankercellijnen, waaronder G1-celcyclusarrest en selectieve apoptose. Het downreguleert angiogene factoren, VEGF en HIF-1α, in U87MG-, MDA361- en LNCap-cellen.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	DELFIA-formaat van gezuiverd FLAG-TOR De routine assays met gezuiverd FLAG-TOR (FL en 3.5) worden uitgevoerd in 96-well platen als volgt. Enzymen worden eerst verdund in kinase assay buffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcystine LR, en 100 lg/mL BSA). Aan elke well wordt 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0.5 μL testremmer of controlevehikel dimethylsulfoxide (DMSO). De kinasereactie wordt geïnitieerd door 12.5 μL kinase assay buffer met ATP en His6-S6K toe te voegen om een eindreactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP en 1.25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt gedurende 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd met zacht schudden en daarna beëindigd door toevoeging van 25 μL Stop buffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van de gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K antilichaam (1A5) gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per antilichaam). Vijfenveertig microliter van het beëindigde kinase reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K wordt gedurende 2 uur gehecht, waarna de wells worden geaspireerd en eenmaal gewassen met PBS. Honderd microliter DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt gedurende 1 uur voortgezet met zachte agitatie. De wells worden vervolgens geaspireerd en vier keer gewassen met PBS met 0.05% Tween 20 (PBST). Honderd microliter DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elke well toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer. Verkregen gegevens worden gebruikt om de enzymatische activiteit en enzymremming door potentiële remmers te berekenen.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentraties 0-100 μM Incubatietijd 24 or 48 hours Methode For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Kinase-assay:^{^[1]}

DELFIA-formaat van gezuiverd FLAG-TOR
De routine assays met gezuiverd FLAG-TOR (FL en 3.5) worden uitgevoerd in 96-well platen als volgt. Enzymen worden eerst verdund in kinase assay buffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcystine LR, en 100 lg/mL BSA). Aan elke well wordt 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0.5 μL testremmer of controlevehikel dimethylsulfoxide (DMSO). De kinasereactie wordt geïnitieerd door 12.5 μL kinase assay buffer met ATP en His6-S6K toe te voegen om een eindreactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP en 1.25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt gedurende 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd met zacht schudden en daarna beëindigd door toevoeging van 25 μL Stop buffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van de gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K antilichaam (1A5) gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per antilichaam). Vijfenveertig microliter van het beëindigde kinase reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K wordt gedurende 2 uur gehecht, waarna de wells worden geaspireerd en eenmaal gewassen met PBS. Honderd microliter DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt gedurende 1 uur voortgezet met zachte agitatie. De wells worden vervolgens geaspireerd en vier keer gewassen met PBS met 0.05% Tween 20 (PBST). Honderd microliter DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elke well toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer. Verkregen gegevens worden gebruikt om de enzymatische activiteit en enzymremming door potentiële remmers te berekenen.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentraties
0-100 μM
Incubatietijd
24 or 48 hours
Methode
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Referenties

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Klantproductvalidatie

: Gegevens van [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Sellecks WAY-600 Is geciteerd door 3 Publicaties

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.