Vismodegib (GDC-0449)

Vismodegib (GDC-0449) richt zich op de Hedgehog signaling pathway, blokkeert de activiteiten van de Hedgehog-ligand celoppervlakreceptoren PTCH en/of SMO en onderdrukt Hedgehog signaling. Deze verbinding voorkomt meerdere ATP-binding cassette (ABC) transporters en blokkeert ook ABCG2, Pgp en MRP1 - belangrijke ABC transporters geassocieerd met MDR. Het is een potente remmer van ABC Transporter, ABCG2/BCRP en ABCB1/Pgp, en is een milde remmer van ABCC1/MRP1. In ABCG2-overexpresserende HEK293-cellen verhoogt het de retentie van het fluorescerende ABCG2-substraat BODIPY en resensitiseert het deze cellen. In Madin-Darby canine kidney II-cellen die zijn gemanipuleerd om Pgp of MRP1 te overexpresseren, verhoogt het de retentie van calcein-AM en resensitiseert het deze cellen. Het resensitiseert ook menselijke niet-kleincellige longcarcinoomcellen NCI-H460/par en NCI-H460/MX20, die ABCG2 overexpresseren als reactie op SN-38. De IC50-waarden voor de preventie van ABCG2 en Pgp zijn respectievelijk ongeveer 1,4 μM en 3,0 μM. [2] Daarnaast verandert het de intracellulaire Ca²⁺-homeostase en remt het de celgroei in resistente longkankercellen. [3]

Vismodegib (GDC-0449) is gebruikt om medulloblastoom te behandelen in diermodellen. [2] Het voorkomt de groei van primaire pancreatische xenografts zonder niet-specifieke remming van pancreatische celproliferatie. Orale toediening van deze verbinding veroorzaakt tumorregressies in het Ptch(+/-) allograftmodel van medulloblastoom bij doses ≥25 mg/kg en tumorremming bij doses tot 92 mg/kg tweemaal daags toegediend in twee ligandafhankelijke colorectale kankermodellen, D5123 en 1040830. Analyse van Hh pathway activiteit en PK/PD-modellering onthult dat het Gli1 remt met een vergelijkbare IC50 in zowel het medulloblastoom als de D5123-modellen (respectievelijk 0,165 μM en 0,267 μM). Pathwaymodulatie is gekoppeld aan werkzaamheid met behulp van een geïntegreerd PK/PD-model dat een steile relatie onthult waarbij > 50% van de activiteit van GDC-0449 geassocieerd is met >80% repressie van de Hh pathway. [4]

• Cellijnen

  MDCKII cells

• Concentraties

  20 μM

• Incubatietijd

  2 hours

• Methode

  MDCKII cells are seeded into 24-well plates at a density of 3 × 10⁵ cells per well and are allowed to attach. Medium is then changed to that containing different drugs (50 μM VP, or 20 μM Vismodegib (GDC-0449) in DMSO or DMSO alone as control, and nonfluorescent calcein-AM is added to a final concentration of 1.0 μM and incubated at 37 °C for 2 hours. It is then used in subsequent steps. Cells are washed twice with Ca²⁺, Mg²⁺-containing Hank's balanced salt solution buffer and lysed by shaking in 0.01% Triton X-100 in PBS buffer for 1 hour at room temperature or overnight at 4 °C. The lysate is then transferred into 96-well plates, and the fluorescence signal caused by the cell-derived calcein is quantified spectrophotometrically with a SpectraMax M5 Multi-Detection Readerusing an excitation wavelength of 495 nm and an emission wavelength of 515 nm. All manipulations are performed in the dark. All readings are expressed as mean ?SEM normalized to the control.

• Dierlijke modellen

  Ptch(+/-) allograft model, D5123 and 1040830

• Doseringen

  ~ 100 mg/kg

• Toediening

  Orally