UNC0631

Catalogusnr.S7610 Batch:S761001

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₃₇H₆₁N₇O₂

Molecuulgewicht

635.93

CAS-nr.

1320288-19-4

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (157.25 mM)

Ethanol

5 mg/mL (7.86 mM)

Water

Insoluble

In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

UNC 0631 is een potente remmer van Histone Methyltransferase G9a met een IC50 van 4 nM. Het verlaagt potent de H3K9me2-niveaus in MDA-MB-231-cellen met een IC50 van 25 nM.

Doelen

G9a

In vitro

In MCF7, 22RV1 en IMR90 cellen verlaagt UNC0631 potent de H3K9me2-niveaus en vertoont het een uitstekende scheiding tussen functionele potentie en celdotoxiciteit. Deze verbinding kan dus worden gebruikt als een hulpmiddel voor de biomedische onderzoeksgemeenschap om de biologie van G9a en de rol ervan in chromatine-remodellering verder te onderzoeken.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	SAHH-gekoppelde assays Deze assay maakt gebruik van SAHH om het methyltransferase product SAH te hydrolyseren tot homocysteïne en adenosine in aanwezigheid van adenosine deaminase dat adenosine omzet in inosine. De homocysteïneconcentratie wordt vervolgens bepaald door de conjugatie van de vrije sulfhydrylgroep ervan met een thiol-gevoelige fluorofoor, ThioGlo. Voor IC50-bepalingen worden assaymengsels bereid in 25 mM kaliumfosfaatbuffer pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01% Triton X-100 met 5 μM SAHH, 0,3 U/mL adenosine deaminase, 25 μM SAM en 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 en SUV39H2 worden geanalyseerd bij respectievelijk 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM en 100 nM. Deze verbinding wordt toegevoegd in concentraties variërend van 4 nM tot 16 μM. Na 2 minuten incubatie worden de reacties geïnitieerd door toevoeging van de histonepeptiden: 10 μM H3(1–25) voor G9a, 20 μM H3(1–25) voor GLP, 100 μM H3(1–25) voor SETD7, 500 μM H4(1–24) voor SETD8, 10 μM H4(1–24) voor PRMT3 en 200 μM H3K9Me1 (1–15) voor SUV39H2. De methyleringsreactie wordt gevolgd door de toename van fluorescentie te monitoren met behulp van een Biotek Synergy2 plaatlezer met een excitatie filter van 360/40 nm en een emissie filter van 528/20 nm gedurende 20 minuten in een 384-putjesplaatformaat. Activiteitswaarden worden gecorrigeerd door achtergrond veroorzaakt door het peptide of het eiwit af te trekken. IC50-waarden worden berekend met Sigmaplot. Standaarddeviaties worden berekend uit twee onafhankelijke experimenten.
Celassay:^[1]	Cellijnen MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells Concentraties ~10 μM Incubatietijd 48 hours Methode MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Kinase-assay:^{^[1]}

SAHH-gekoppelde assays
Deze assay maakt gebruik van SAHH om het methyltransferase product SAH te hydrolyseren tot homocysteïne en adenosine in aanwezigheid van adenosine deaminase dat adenosine omzet in inosine. De homocysteïneconcentratie wordt vervolgens bepaald door de conjugatie van de vrije sulfhydrylgroep ervan met een thiol-gevoelige fluorofoor, ThioGlo. Voor IC50-bepalingen worden assaymengsels bereid in 25 mM kaliumfosfaatbuffer pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01% Triton X-100 met 5 μM SAHH, 0,3 U/mL adenosine deaminase, 25 μM SAM en 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 en SUV39H2 worden geanalyseerd bij respectievelijk 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM en 100 nM. Deze verbinding wordt toegevoegd in concentraties variërend van 4 nM tot 16 μM. Na 2 minuten incubatie worden de reacties geïnitieerd door toevoeging van de histonepeptiden: 10 μM H3(1–25) voor G9a, 20 μM H3(1–25) voor GLP, 100 μM H3(1–25) voor SETD7, 500 μM H4(1–24) voor SETD8, 10 μM H4(1–24) voor PRMT3 en 200 μM H3K9Me1 (1–15) voor SUV39H2. De methyleringsreactie wordt gevolgd door de toename van fluorescentie te monitoren met behulp van een Biotek Synergy2 plaatlezer met een excitatie filter van 360/40 nm en een emissie filter van 528/20 nm gedurende 20 minuten in een 384-putjesplaatformaat. Activiteitswaarden worden gecorrigeerd door achtergrond veroorzaakt door het peptide of het eiwit af te trekken. IC50-waarden worden berekend met Sigmaplot. Standaarddeviaties worden berekend uit twee onafhankelijke experimenten.

Celassay:^[1]

Cellijnen
MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells
Concentraties
~10 μM
Incubatietijd
48 hours
Methode
MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21780790/

Sellecks UNC0631 Is geciteerd door 1 Publicatie

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]

PubMed: 30135193

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.