Trametinib DMSO solvate (GSK1120212B)

GSK1120212 remt de fosforylering van MBP, ongeacht het isotoop van Raf en MEK, met IC50 variërend van 0,92 nM tot 3,4 nM. GSK1120212 toont geen remming van de kinaseactiviteiten van c-Raf, B-Raf, ERK1 en ERK2. Bovendien vertoont GSK1120212 geen drastische remmende activiteit tegen de andere 98 kinasen. GSK1120212 vertoont potente remmende activiteit tegen menselijke colorectale kankercellijnen. HT-29 en COLO205 cellen, waarvan bekend is dat ze een constitutief actieve B-Raf mutant hebben, zijn het meest gevoelig voor GSK1120212 met een IC50 van respectievelijk 0,48 nM en 0,52 nM. De cellijnen met een K-Ras mutatie vertonen een breed scala aan gevoeligheid voor GSK1120212 met een IC50 van 2,2-174 nM. Daarentegen blijken COLO320 DM cellen, die het wildtype gen in zowel B-Raf als K-Ras bevatten, resistent te zijn tegen GSK1120212, zelfs bij 10 μM. GSK1120212 behandeling gedurende 24 uur induceert celcyclusarrest in de G1-fase in alle gevoelige cellijnen. Consistent hiermee leidt GSK1120212 behandeling tot opregulatie van p15INK4b en/of p27KIP1 in de meeste colorectale kankercellijnen. GSK1120212 remt constitutieve ERK-fosforylering in alle gevoelige cellijnen. GSK1120212 induceert apoptosis in zowel HT-29 als COLO205 cellen, maar COLO205 cellen zijn gevoeliger voor GSK1120212 dan HT-29 cellen wat betreft apoptosis inductie.[1] GSK1120212 blokkeert de productie van tumornecrosefactor-α en interleukine-6 uit perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's).[2]

Orale toediening van GSK1120212 bij 0,3 mg/kg of 1 mg/kg eenmaal daags gedurende 14 dagen is effectief in het remmen van de HT-29 xenograftgroei, en 1 mg/kg GSK1120212 blokkeert de tumorgroei bijna volledig. De fosforylering van ERK1/2 wordt volledig geremd in de gevestigde tumorweefsels door een enkele orale dosis van 1 mg/kg GSK1120212, en zowel p15INK4b als p27KIP1 eiwitniveaus worden opgereguleerd na 14 dagen behandeling met GSK1120212. In het COLO205 xenograftmodel wordt tumorregressie waargenomen, zelfs bij een dosis van 0,3 mg/kg. Bij een dosis van 1 mg/kg wordt een complete regressie verkregen bij 4 van de 6 muizen, waarbij de tumor degenereert tot het punt dat het tumorvolume niet meetbaar is.[1] Toediening van GSK1120212 bij 0,1 mg/kg onderdrukt bijna volledig adjuvans-geïnduceerde artritis (AIA) en type II collageen-geïnduceerde artritis (CIA) in respectievelijk Lewis-ratten of DBA1/J-muizen.[2]

• Raf-MEK-ERK cascade kinase test

  Niet-gefosforyleerd myeline basisch proteïne (MBP) wordt gecoat op een ELISA-plaat, en de actieve vorm van B-Raf/c-Raf wordt gemengd met niet-gefosforyleerd MEK1/MEK2 en ERERK2 in 10 μM ATP en 12,5 mM MgCl2 bevattende MOPS-buffer in aanwezigheid van verschillende concentraties GSK1120212. De fosforylering van MBP wordt gedetecteerd door de anti-fosfo-MBP antilichaam.

• Cellijnen

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320 cells

• Concentraties

  ~10 μM

• Incubatietijd

  3 or 4 days

• Methode

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to GSK1120212. Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Dierlijke modellen

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Doseringen

  ~1 mg/kg/day

• Toediening

  o.g.