CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

Catalogusnr.S5001 Batch:S500113

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C16H20N6O.C6H8O7
Molecuulgewicht 504.49 CAS-nr. 540737-29-9
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Tofacitinibcitraat (CP-690550, Tasocitinib) is een nieuwe JAK-remmer met IC50-waarden van respectievelijk 1 nM, 20 nM en 112 nM tegen JAK3, JAK2 en JAK1. Het heeft ook een anti-infectieuze werking.
Doelen
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
In vitro Tofacitinibcitraat remt IL-2-gemedieerde proliferatie van menselijke T-celblasten en IL-15-geïnduceerde CD69-expressie met respectievelijk IC50-waarden van 11 nM en 48 nM. Tofacitinibcitraat voorkomt gemengde lymfocytenreactie met een IC50 van 87 nM. Behandeling met Tofacitinibcitraat van murine factorafhankelijke cel Patersen–erytropoëtine receptor (FDCP-EpoR) cellen die humane wild-type of V617F JAK2 bevatten, leidt tot preventie van celproliferatie met respectievelijk IC50-waarden van 2,1 µM en 0,25 µM. Tofacitinibcitraat remt interleukine-6-geïnduceerde fosforylering van STAT1 en STAT3 met respectievelijk IC50-waarden van 23 nM en 77 nM. Bovendien genereert Tofacitinibcitraat een significant pro-apoptotisch effect op murine FDCP-EpoR-cellen die JAK2VV617F dragen, terwijl een minder effect wordt waargenomen voor cellen die wild-type JAK2 dragen. Deze activiteit is gekoppeld aan de remming van fosforylering van de belangrijkste JAK2V617F-afhankelijke stroomafwaartse signaaloverdragers en activatoren van transcriptie (STAT)3, STAT5, en v-akt murine thymoma virale oncogen homoloog (AKT). Bovendien voorkomt Tofacitinibcitraat in vitro IL-15-geïnduceerde CD69-expressie in humane en cynomolgusapen NK- en CD8+-T-cellen.
In Vivo Tofacitinibcitraat vermindert een vertraagde overgevoeligheidsreactie en verlengde overleving van hartallotransplantaten in murine modellen. Bovendien resulteert Tofacitinibcitraatbehandeling van ex-vivo geëxpandeerde erytroïde voorlopers van JAK2V617F-positieve PV-patiënten in specifieke, antiproliferatieve (IC50 = 0,2 μM) en pro-apoptotische activiteit. Daarentegen zijn geëxpandeerde voorlopers van gezonde controles minder gevoelig voor Tofacitinibcitraat in proliferatie (IC50 > 1,0 μM) en apoptoseassays. Tijdens 2 weken Tofacitinibcitraatdosering van 10 en 30 mg/kg/dag wordt een significante, tijdsafhankelijke afname van het aantal NK-cellen waargenomen ten opzichte van de vehikelbehandeling. Het aantal effector-geheugen-CD8+-cellen in de met Tofacitinibcitraat behandelde groep is 55% minder dan wat werd waargenomen bij dieren die met vehikel werden behandeld.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • Enzymtesten

    De JAK1-, JAK2- en JAK3-kinaseassays maken gebruik van een eiwit dat tot expressie wordt gebracht in met baculovirus geïnfecteerde SF9-cellen (een fusie-eiwit van GST en het katalytische domein van humaan JAK-enzym), gezuiverd door affiniteitschromatografie op glutathion-Sepharose. Het substraat voor de reactie is polyglutaminezuur-tyrosine [PGT (4:1)], overnacht bij 37 °C gecoat op Nunc Maxi Sorp-platen bij 100 μg/mL. De platen worden driemaal gewassen en JAK-enzym wordt toegevoegd aan de putjes, die 100 μL kinasebuffer (50 mM HEPES, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM natriumorthovanadaat bevatten. Voor Tofacitinibcitraat wordt het ook in verschillende doses toegevoegd voor de kinaseassay. Na incubatie bij kamertemperatuur gedurende 30 min worden de platen driemaal gewassen. Het niveau van gefosforyleerd tyrosine in een gegeven putje wordt bepaald door een standaard ELISA-assay met behulp van een anti-fosfotyrosine-antilichaam.
Celassay:

[2]
  • Cellijnen

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • Concentraties

    0-4 μM

  • Incubatietijd

    72 hours

  • Methode

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
Dierstudie:

[2]
  • Dierlijke modellen

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • Doseringen

    10, 30 mg/kg/d

  • Toediening

    Oral gavage

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

Klantproductvalidatie

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Gegevens van [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

Sellecks CP-690550 (Tofacitinib) Citrate Is geciteerd door 198 Publicaties

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.