Seletalisib (UCB-5857)

Seletalisib (UCB-5857) is een potente, ATP-competitieve en selectieve PI3Kδ-remmer die de fosforylering van proteïnekinase B (AKT) kan blokkeren na activering van de B-celreceptor in een B-cellijn. Bovendien remde het de N-formylpeptide-gestimuleerde maar niet de forbolmyristaatacetaat-gestimuleerde superoxideafgifte door humane neutrofielen, consistent met een PI3Kδ-specifieke activiteit. Bevindingen uit cellulaire assays van adaptieve immuniteit toonden aan dat deze verbinding de productie van verschillende cytokinen door geactiveerde T-cellen blokkeert. Bovendien remde het de B-celproliferatie en cytokinerelease. In assays met humaan volbloed onderdrukte de remmer de CD69-expressie na B-celactivering en anti-IgE-gemedieerde basofiele degranulatie. Van de 239 gescreende kinasen vertoonde seletalisib bij een concentratie van 10 μM geen remmende activiteit van meer dan 47% (MAP4K4) tegen niet-PI3K-kinase-enzymen. Tegen niet-kinase-enzymen vertoonde het zwakke activiteiten tegen fosfodiësterase (PDE)3A, PDE2A1 en PDE4D2, met een remming variërend tussen 32 en 74% bij 10 μM. Bij screening bij een concentratie van 10 μM tegen 55 receptoren en ionkanalen was de hoogst waargenomen remmende activiteit 20%. Eén receptor, de neuropeptide Y-receptor (Y1), vertoonde 54% activering. In vitro receptorbinding en enzymassays over een breed scala aan doelwitklassen toonden aan dat het selectief is voor PI3Kδ. De verbinding remde potent de fosforylering van AKT na anti-IgM-stimulatie van de BCR op Ramos-cellen met een IC50 van 15 nM[1]. Bij profilering in een breed scala aan primaire celassaysystemen, waaronder fibroblasten, epitheliale, endotheliale en vasculaire gladde spiercellen, vertoonde het alleen significante activiteit in systemen die lymfocyten bevatten, wat de functionele selectiviteit voor PI3Kδ-expresserende cellen aantoont[2].

Seletalisib (UCB-5857) vertoont een dosisafhankelijke remming in een in vivo rattenmodel van anti-CD3-antilichaam-geïnduceerde interleukine-2-afgifte. Analyse van de relatie tussen de remming van IL-2-afgifte en de bloedconcentratie, met behulp van gecombineerde gegevens van verschillende experimenten, toonde aan dat deze verbinding potente in vivo effecten heeft met een geschatte IC50-waarde van <10 nM[1]. In 'first-in-man' studies namen de gemiddelde plasmaconcentratie-tijdprofielen toe met toenemende dosis na enkelvoudige en meervoudige dosering, zonder grote afwijkingen van dosisproportionaliteit. Er was geen onverwachte accumulatie of verlies van blootstelling na meervoudige dosering (tijdsonafhankelijk farmacokinetisch (PK) profiel) en de schijnbare t1/2-waarden (ongeveer 20 uur) ondersteunden een eenmaal daagse dosering[2].

• In Vitro Kinase Activiteitsassays en Off-Target Profilering

  De activiteiten van seletalisib (UCB-5857) en de pan-PI3K-remmer UCB1370037 werden getest in biochemische kinase-assays van de PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ en PI3Kγ (in-house geproduceerde) isoformen. Er werden competitieve tijdopgeloste (TR) fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET) assays uitgevoerd met behulp van een vierstaps PI3K-assay-reagenskit. In deze assay wordt de PI3K-activiteit gemeten door de detectie van fosfatidylinositoltrifosfaat (PIP3) als volgt: Er wordt een complex gevormd tussen gebiotinyleerd PIP3 en een glutathion-S-transferase (GST)-gelabeld pleckstrine-homologiedomeinproteïne, die worden gedetecteerd door streptavidine-allofycocyanine (APC) en europium-gelabeld anti-GST-antilichaam, respectievelijk. Nabijheid van de twee fluoroforen resulteert in een stabiel TR-FRET-signaal. De productie van ongelabeld PIP3 door PI3K in de kinasereactie resulteert in competitieve remming van het complex en dus van het FRET-signaal. Kort gezegd werd 2 μl van de verbinding toegevoegd aan putjes die 8 μl van een mengsel met fosfatidylinositolbisfosfaat (PIP2) substraat en ATP bevatten, vóór toevoeging van 10 μl PI3K (voorverdund tot de vereiste concentratie). De uiteindelijke assayconcentraties van ATP en PIP2-substraat waren respectievelijk 2 μM en 10 μM. De uiteindelijke assayconcentratie van PI3K-enzymen was 1–8 nM, afhankelijk van de batchactiviteit. De uiteindelijke assayconcentratie van DMSO was 2,0%. De plaat werd gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd vóór toevoeging van stopbuffer en detectiebuffer volgens de instructies van de fabrikant, en de plaat werd vervolgens nog eens 6 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. TR-FRET-metingen werden uitgevoerd op een Analyst GT-plaatlezer. De ATP-concentratieafhankelijkheid van de activiteit van deze verbinding tegen PI3Kδ werd vastgesteld door de assay uit te voeren in aanwezigheid van variërende ATP-concentraties (2, 40, 200 en 1000 μM). De uiteindelijke assayconcentraties van PI3Kδ en PIP2-substraat in deze assays waren respectievelijk 1 nM en 25 μM.

• Cellijnen

  Ramos B-cell line

• Concentraties

  0.1 nM-10 μM

• Incubatietijd

  10 min

• Methode

  Serially diluted seletalisib (UCB-5857) and goat anti-human F(ab)2 IgM in serum-free RPMI 1640 were added to Ramos cells plated in serum-free RPMI 1640. The plate was incubated for 10 minutes, chilled on ice, and the cells pelleted by centrifugation. Cellular phosphorylated AKT was detected by MSD assay.

• Dierlijke modellen

  Adult Lewis rats (male, 6-8 weeks of age)

• Doseringen

  0.1-10 mg/kg in 500 μl volume

• Toediening

  via oral gavage