In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
Bisindolylmaleimide IX (Ro 31-8220 Mesylate) is een pan-PKC-remmer met een IC50 van 5 nM, 24 nM, 14 nM, 27 nM en 24 nM voor respectievelijk PKC-α, PKC-βI, PKC-βII, PKC-γ en PKC-ε, en vertoont ook een krachtige remming tegen MAPKAP-K1b, MSK1, GSK3β en S6K1.
Doelen
PKCα (Cell-free assay)
PKCβ2 (Cell-free assay)
PKCβ1 (Cell-free assay)
PKCε (Cell-free assay)
PKCγ (Cell-free assay)
5 nM
14 nM
24 nM
24 nM
27 nM
In vitro
Ro 31-8220 remt de PKC-activiteit van rattenhersenen met een IC50 van 23 nM en vertoont geen hoge mate van selectiviteit tussen PKC-α, PKC-β, PKC-γ en PKC-ε. Ro 31-8220 remt ook MSK1, MAPKAPK1, RSK, GSK3β en S6K1 met een potentie die vergelijkbaar is met die voor PKC. Bovendien remt Ro 31-8220 spanningsafhankelijke Na+-kanalen. Ro 31-8220 verandert de cellulaire PKC-lokalisatie en remt krachtig de groei van A549- en MCF-7-cellen met een IC50 van respectievelijk 0,78 μM en 0,897 μM. RO 31-8220 versterkt epinefrine-geïnduceerde bloedplaatjesaggregatie in catecholamine-hyporesponsieve bloedplaatjes door Akt-fosforylering te versterken. Ro 31-8220 vermindert significant de apoE-secretie uit primaire humane macrofagen door vesiculair transport van apoE naar het plasmamembraan te remmen zonder de apoE mRNA- of apoE-eiwitniveaus significant te beïnvloeden.
In Vivo
Bij MLP−/−-muizen resulteert Ro 31-8220 (6 mg/kg/d, s.c.) in een significante toename van de hartcontractiliteit.
Analysemengsels bevatten 0,2 mg/mL peptide-gamma, 10 μM MgCl2, 0,6 mM CaCl2, 10 μM [γ-32P]ATP, 1,25 mg/mL fosfatidylserine en 1,25 ng/mL forbol 12-myristaat 13-acetaat in 20 mM Hepes (pH 7,5), 2 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol en 0,02% (w/v) Triton X-100. Peptide-γ is een synthetisch peptide, GPRPLFCRKGSLRQKW, dat lijkt op de PKC-γ pseudosubstraatplaats, behalve dat een serineresidu de pseudosubstraatalanine vervangt, waardoor het peptide van een remmer in een substraat wordt omgezet. De assays worden gestart door de toevoeging van 2,5 m-eenheden enzym, geïncubeerd bij 30 °C gedurende 10 min en beëindigd door te spotten op P81-papier, gevolgd door uitgebreid wassen in 75 mM orthofosforzuur. De papieren worden vervolgens gewassen in ethanol, gedroogd, en de geïncorporeerde radioactiviteit wordt bepaald door vloeistofscintillatiespectroscopie.
Human A549 lung and MCF-7 breast carcinoma cells are obtained from the European Collection of Animal Cell Cultures. Cells (passage number 10-30) are cultured in an atmosphere of 5% carbon dioxide, the former in Ham's F-12 medium with penicillin/streptomycin, the latter in minimum essential medium (Eagle's modification) with additional pyruvate (1 mM) and non-essential amino acids. Both media are supplemented with 10% FCS and glutamine (2 mM). Cells are subcultured routinely twice weekly to maintain logarithmic growth. For cell proliferation studies cells are seeded and incubated with 3 ml of medium including agents, which is replenished at intervals of 48 h (A549) or 72 h (MCF-7). Following incubation for 4 days (A549) or 6 days (MCF-7) with drugs, cell number is assessed using a Coulter Counter Model ZM. In order to achieve PKC depletion, cells are incubated for 24 h with bryostatin 1 (1 μM). Under these conditions growth inhibition caused by bryostatin 1 is negligible. Bryostatin is removed by extensive washing of the cells followed by a 2 h recovery period. In previous work using the A549 cell line this washing procedure has been shown to eliminate bryostatin-mediated effects. The cells are then incubated for a further 24 h with staurosporine, RO 31-8220, UCN-01 or H-7. In some experiments cells are incubated with inhibitor for 48 rather than 24 h, in this case bryostation was not removed and left in the incubate. After removal of agents inhibition of DNA synthesis is evaluated by measurement of [3H]Tdr incorporation into cell. Radioactivity is counted using a Packard 1500 Tricarb scintillation counter.
Alternative splicing of HDAC7 regulates its interaction with 14-3-3 proteins to alter histone marks and target gene expression
[ Cell Rep, 2023, 42(3):112273]
Naturally-derived diterpenoid sphaeropsidin C as an activator of Nrf2/ARE pathway and its potential capability of relieving intracellular oxidative stress in human lung epithelial cells.
[ Biomed Pharmacother, 2020, 121:109669]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
