Regorafenib (BAY 73-4506)

Regorafenib voorkomt sterk de autofosforylering van VEGFR2 in NIH-3T3/VEGFR2-cellen met een IC50 van 3 nM. In HAoSMC's onderdrukt deze verbinding de autofosforylering van PDGFR-β na stimulatie met PDGF-BB, met een IC50 van 90 nM. Het remt ook de FGFR-signalering in MCF-7 borstkankercellen (BC) gestimuleerd met FGF10. Deze chemische stof remde zeer potent de mutante receptoren KIT^K642E en RET^C634W, met een IC50 van respectievelijk ongeveer 20 nM en 10 nM. Het remt de proliferatie van VEGF¹⁶⁵-gestimuleerde HUVEC's, met een IC50 van ongeveer 3 nM. Deze verbinding voorkomt de proliferatie van FGF2-gestimuleerde HUVEC's en van PDGF-BB-gestimuleerde HAoSMC's met een IC50 van respectievelijk 127 nM en 146 nM. [1] Het richt zich op zowel de proliferatie van tumorcellen als de tumorvasculatuur door remming van receptoren van Protein Tyrosine Kinase (VEGFR, KIT, RET, FGFR en PDGFR) en serine/threoninekinases (Raf en p38MAPK). [2] Deze chemische stof onderdrukt de groei van menselijke Hep3B-, PLC/PRF/5- en HepG2-cellen op een concentratie- en tijdsafhankelijke manier. [3]

Regorafenib vertoont een potente dosisafhankelijke TGI in verschillende preklinische humane xenograftmodellen bij muizen, met tumorverkleining in borstkanker MDA-MB-231 en niercelcarcinoom 786-O-modellen. Deze verbinding voorkomt niet alleen de groei van syngene primaire 4T1-borsttumoren die orthotopisch in het vetkussen groeien, maar onderdrukt ook de vorming van tumormetastasen in de long. [1]

• Kinase-assays

  In vitro assays met recombinante VEGFR2 (muis aa785–aa1367), VEGFR3 (muis aa818–aa1363), PDGFRβ (aa561–aa1106), Raf-1 (aa305–aa648) en BRafV600E (aa409–aa765) kinase-domeinen worden uitgevoerd. De initiële in vitro kinase-remming profilering wordt uitgevoerd bij een vaste concentratie van 1 μM van deze verbinding. Inhiberende concentratie van 50% (IC50) waarden worden bepaald uit geselecteerde reagerende kinasen, bijv. VEGFR1 en RET. TIE2 kinase-remming wordt gemeten met een homogene time-resolved fluorescence (HTRF) assay met behulp van een recombinant fusie-eiwit van glutathion-S-transferase, het intracellulaire domein van TIE2 en het peptide biotine-Ahx-EPKDDAYPLYSDFG als substraat.

• Cellijnen

  GIST 882 and TT cells

• Concentraties

  5 nM-10 μM

• Incubatietijd

  96 hours

• Methode

  For proliferation assays, GIST 882 and TT cells are grown in RPMI medium containing L-glutamine, and MDA-MB-231, HepG2 and A375 cells in DMEM always containing 10% hiFBS. Cells are trypsinized, plated at 5×10⁴ cells/well in 96-well plates in complete media containing 10% FBS and grown overnight at 37 °C. The next day, vehicle or Regorafenib serially diluted in complete growth media to between 10 μM and 5 nM final concentrations, and 0.2% DMSO, is added and incubation is continued for 96 hours. Cell proliferation is quantified.

• Dierlijke modellen

  Female athymic NCr nu/nu mice with Colo-205, MDA-MB-231 or 786-O

• Doseringen

  3 mg/kg, 10 mg/kg, 30 mg/kg, 100 mg/kg

• Toediening

  Orally