In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
PF-5274857 is een krachtige en selectieve Smoothened (Smo)-antagonist, remt de Hedgehog (Hh)-signalering met IC50 en Ki van respectievelijk 5,8 nM en 4,6 nM, en deze verbinding kan de bloed-hersenbarrière passeren.
Doelen
Smoothened
Smoothened
4.6 nM(Ki)
5.8 nM
In vitro
PF-5274857 remt de Shh-geïnduceerde Hh-padactiviteit volledig met een IC50 van 2,7 nM, gemeten door de transcriptieactiviteit van Smo downstream-gen Gli1 in MEF-cellen. De μ-opioïdereceptor wordt zwak geremd door deze verbinding met een dissociatieconstante van 36 μM, vervolgens bepaald in een functionele assay.
In Vivo
PF-5274857 vertoont significante dosisafhankelijke tumorgroeiremming (TGI) en induceert tumorregressie bij hoge doses (>10 mg/kg). Deze verbinding reguleert de genexpressieniveaus van Gli1, Gli2, Ptch1 en Ptch2 in verschillende mate met maximale effecten die worden bereikt tussen 6 en 12 uur na toediening (Gli1 is het meest gevoelige gen), terwijl het weinig effect heeft op de Smo-niveaus. In huidweefsel wordt ook neerwaartse regulatie van Gli1 en Gli2 waargenomen met een vergelijkbaar tijdsverloop door deze chemische stof. De modelafgeleide geneesmiddelconcentratie voor halfmaximale remming van de tumor-Gli1-mRNA-productiesnelheid (IC50) door deze verbinding wordt bepaald op 8,9 nM in de Ptch+/−p53+/− medulloblastoom-allotransplantaatmuizen, wat wiskundig overeenkomt met tumorregressie van 119% TGI na 6 dagen plasma-expositie bij deze concentratie. In de Ptch+/−p53−/− medulloblastoom-allotransplantaatmuizen wordt de IC50-waarde geschat op 3,5 nM, consistent met de Ptch+/−p53+/− resultaten. Het is ook in staat om de bloed-hersenbarrière bij ratten binnen 4 uur na toediening te passeren.
HEK293-cellen die humaan Smo (aminozuren 181-787) overexpresseren, worden gekweekt in Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) aangevuld met 10% FBS, Pen–Strep en 0,1 mg/mL hygromycine tot 90% confluentie. Na wassen met koud Dulbecco's PBS wordt het celpellet geresuspendeerd in membraanbereidingsbuffer (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 250 mM sucrose met Roche complete proteasecocktail) en gehomogeniseerd. Het homogenaat wordt gecentrifugeerd en het celpellet wordt geresuspendeerd in assaybuffer (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 100 mM NaCl, 25 mM MgCl2, 1 mM EDTA en 0,1% proteasevrij runderalbumine) en gehomogeniseerd in een glazen weefselstamper. Totaal eiwit in de membraanbereiding die Smo bevat, wordt bepaald met behulp van de Pierce BCA-eiwittest. Voor de competitieve bindingsassay wordt 100 μL assaybuffer gedurende 10 minuten aan een 96-well GF/B-filterplaat toegevoegd om het filter voor te bevochtigen en vervolgens verwijderd. De volgende reagentia worden vervolgens toegevoegd: 20 μL assaybuffer, 10 μL seriële verdunningen van deze verbinding, 20 μL 3H-Smo-antagonist (3 nM eindconcentratie) en 50 μL membraanbereiding (40 μg totaal eiwit). De platen worden gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd, vervolgens gewassen en vacuümgedroogd. De platen worden vervolgens 1 uur gedroogd in een oven van 60°C voordat 45 μL Microscint 20 wordt toegevoegd en gedurende 30 minuten tot 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd, waarna ze worden geteld in een TopCount scintillatieteller. De gegevens worden geanalyseerd met behulp van GraphPad Prism-software.
Gli-Luc/MEF cells are grown in the knockout DMEM supplemented with 10% heat-inactive FBS, 2 mM l-glutamine, and 0.55 mM β-mercaptoethanol until 90% confluence. On day 1, cells are trypsinized and seeded into white 384-well plates in 20 μL per well of OptiMEM media that is supplemented with 1% heat-inactive FBS and 1 mM sodium pyruvate at a concentration of 7,500 cells per well. Plates are incubated at 37 °C and 5% CO2 overnight. On day 2, this compound is added to the cells at a final concentration ranging from 3 μM to 50 pM at a 3-fold serial dilution followed by addition of recombinant mouse Sonic Hedgehog to a final concentration of 2 μg/mL. The cells are incubated with this chemical and Shh for 48 hours at 37 °C and 5% CO2. Luciferase assays are conducted on day 4 using the Bright-Glo Luciferase Assay System. Briefly, Bright-Glo luciferase reagent (25 μL) is added to each well of the 384-well plate containing media. Plates are kept at room temperature for 5 minutes and then read on a Luminescence plate reader. The IC50 value of this compound is calculated.
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
