PCI-34051

PCI-34051 bezit een veelbelovende potentie voor HDAC8 met een K_i van 10 nM. Deze verbinding heeft een hoge selectiviteit (ongeveer vijf keer) voor HDAC8 ten opzichte van de andere klasse I HDAC's, inclusief HDAC1. Het vertoont een meer dan 200-voudige selectiviteit over HDAC1 en HDAC6, en een meer dan 1000-voudige selectiviteit over HDAC2, HDAC3 en HDAC10. Deze chemische stof remt de ovariële tumorlijn OVCAR-3 met een GI50 van 6 μM en 15% celdood. Noch significante tubuline- noch histonacetylering wordt waargenomen in de gevoelige cellijnen die met deze verbinding zijn behandeld bij concentraties van minder dan 25 μM na 24 uur, noch op eerdere tijdstippen. Het induceert een selectief cytotoxisch effect in cellijnen die alleen afkomstig zijn van T-celmaligniteiten. Deze verbinding induceert caspase-afhankelijke apoptose. Wanneer de caspase-3-activiteit wordt gemeten op verschillende tijdstippen na behandeling met 5 μM van deze chemische stof, worden toenemende activiteitsniveaus waargenomen van 12 tot 24 tot 48 uur, een ander kenmerk van apoptose, consistent met de hogere niveaus van caspase-activiteit op dit tijdstip. Het stimuleert geen Bid-splitsing, een kenmerkend effect van de extrinsieke apoptotische route. Terwijl P116 en J.RT3-T.5 gevoelig zijn voor deze verbinding, onthult de PLCγ1-deficiënte J.gamma1-lijn een duidelijke afname van de mate van geïnduceerde apoptose. Bovendien beïnvloeden de steady-state calciumspiegels de apoptose die door deze chemische stof wordt geïnduceerd sterk. Het induceert de afgifte van cytochroom c uit mitochondriën.[1]

PCI-34051 is een krachtige en specifieke HDAC8-remmer.

• Histonedeacetylase-activiteit

  Voor de karakterisering van PCI-34051 worden metingen uitgevoerd in een reactievolume van 100 μL met behulp van 96-well assayplaten in een fluorescentieplaatlezer. Voor elk isozym. Het HDAC-eiwit in reactiebuffer (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001% Tween-20, 5% dimethylsulfoxide, pH 7,4, aangevuld met runder serumalbumine in concentraties van 0-0,05%) wordt gemengd met deze verbinding in verschillende concentraties en gedurende 15 min. geïncubeerd. Trypsine wordt toegevoegd tot een eindconcentratie van 50 nM, en acetyl-gly-Ala-(N-acetyl-Lys)-amino-4-methylcoumarine wordt toegevoegd tot een eindconcentratie van 25-100 μM om de reactie te starten. Na een vertragingstijd van 30 min. wordt de fluorescentie gedurende 30 min. gemeten met een excitatiegolflengte van 335 nm en een detectiegolflengte van 460 nm. De toename van de fluorescentie in de tijd wordt gebruikt als maat voor de reactiesnelheid.

• Cellijnen

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Concentraties

  5 μM

• Incubatietijd

  24 hours

• Methode

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Dierlijke modellen

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Doseringen

  40 mg/kg

• Toediening

  i.p.