In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
NVP-BVU972 is een selectieve en krachtige Met (c-Met) remmer met een IC50 van 14 nM.
Doelen
Met
14 nM
In vitro
NVP-BVU972 remt MET kinase krachtig, maar vertoont een lage remming tegen andere kinasen, waaronder de meest nauw verwante kinase RON met IC50-waarden van meer dan 1000 nM. Deze verbinding onderdrukt ook constitutieve MET-fosforylatie in GTL-16-cellen of HGF-gestimuleerde MET-fosforylatie in A549-cellen met IC50-waarden van respectievelijk 7,3 nM en 22 nM. Het voorkomt krachtig de groei van de MET-gen geamplificeerde cellijnen GTL-16, MKN-45 en EBC-1 met IC50-waarden van respectievelijk 66 nM, 82 nM en 32 nM. In lijn met hun hoge frequentie in het compoundscherm veroorzaken Y1230- en D1228-mutaties dramatische verschuivingen in de gemeten IC50-waarden ervoor in de BaF3-cellijn. Resistentie getriggerd door V1155L is meer beperkt tot deze chemische stof. Een dosisafhankelijke reductie in TPR-MET-fosforylatie bij toepassing ervan op BaF3-cellen die wild-type TPR-MET tot expressie brengen. Zowel Y1230H- als D1228A-mutaties hieven het effect van deze verbinding op, maar niet dat van AMG 458. F1200I en L1195V interfereren echter met de potentie ervan om TPR-MET-fosforylatie te voorkomen.
TR-FRET biochemische analyse met MET wildtype en mutanten
Enzymactiviteit wordt gemeten in een 'time resolved fluorescence resonance energy transfer' (TR-FRET) analyse, waarbij tyrosinefosforylatie wordt gedetecteerd met een Eu-gelabeld anti-fosfo-tyrosine antilichaam (fluorescentiedonor) en Allophycocyanine geconjugeerd aan Streptavidine (fluorescentieacceptor) dat bindt aan een biotine op het substraatpeptide. Voor elke variant worden Km-concentraties voor ATP bepaald in afwezigheid van deze verbinding, en de ATP-concentratie in de kinasereactie wordt ingesteld op Km (4 μM voor MET wt, 1 μM voor MET Y1230H en MET F1200I). Het wordt opgelost en verdund in DMSO en in viervoud getest. Kinase reacties worden uitgevoerd in 50 mM Tris-HCl pH 7,5, 8 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0,05% Tween 20, 0,05% bovine serumalbumine, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,1 mM Na3VO4, in witte 1536-wells platen bij kamertemperatuur. Deze chemische stof en enzym worden gedurende 20 min geïncubeerd in een volume van 2 μL, gevolgd door de toevoeging van 1 μL ATP en 1 μL gebiotinyleerd peptide substraat (PTK1) tot uiteindelijke concentraties van respectievelijk Km en 1 μM. Enzymconcentraties in de reacties zijn 5 nM voor MET wt, en 4 nM voor de F1200I en Y1230H varianten. Na 90 min worden de reacties gestopt door toevoeging van 1 μL stop/detectie oplossing om finale concentraties van 10 mM EDTA, 3,5 nM Eu-gelabeld anti-fosfo-tyrosine antilichaam PY20, en 10 nM Streptavidine Allophycocyanine te bereiken. Tijd-opgeloste fluorescentie resonantie energieoverdracht wordt gemeten in een Envision plaatlezer (excitatie 320 nm, emissie 615 nm en 665 nm).
BaF3 cells containing TPR-MET or various mutants thereof are grown in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum. For maintenance of parental BaF3 cells the medium is additionally supplemented with 10 ng/mL interleukin-3 (IL-3). For proliferation assays, BaF3 cells are seeded on 96-well-plates in triplicates at 104 cells per well and incubated with various concentrations of this compound for 72 hours followed by quantification of viable cells using a resazurin sodium salt dye reduction readout. IC50 values are determined with the XLFit Excel Add-In using a 4-parameter dose response model.
Referenties
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21697284/
Sellecks NVP-BVU972 Is geciteerd door 1 Publicatie
A chemical screen for modulators of mRNA translation identifies a distinct mechanism of toxicity for sphingosine kinase inhibitors
[ PLoS Biol, 2021, 19(5):e3001263]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
