Nirogacestat (PF-03084014)

Catalogusnr.S8018 Batch:S801802

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C27H41F2N5O
Molecuulgewicht 489.64 CAS-nr. 1290543-63-3
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 97 mg/mL (198.1 mM)
Ethanol 97 mg/mL (198.1 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Nirogacestat (PF-03084014, PF-3084014) is een selectieve gamma-secretase-remmer met een IC50 van 6,2 nM in een celvrije test, en het induceert apoptosis. Fase 2.
Doelen
gamma-secretase
(cell-free assay)
6.2 nM
In vitro Nirogacestat (PF-03084014) remt de splitsing van de Notch-receptor in cellulaire assays met HPB-ALL-cellen die mutaties bevatten in zowel de heterodimerisatie- als de PEST-domeinen in Notch1 met een IC50 van 13,3 nM. Het reguleert de Notch-doelgenen Hes-1 en cMyc-expressie in HPB-ALL-cellen neerwaarts met een IC50 van <1 nM en 10 nM, respectievelijk, en remt de celgroei van een subset van menselijke T-ALL-cellijnen (HPB-ALL, DND-41, TALL-1 en Sup-T1) door inductie van celcyclusarrest en apoptosis met IC50's van 30-100 nM. Deze verbinding vermindert de proliferatie van HUVEC's met een IC50 van 0,5 μM en vermindert de lumenformatie met een IC50-waarde van 50 nM. Het (1 μM) heeft geen antiproliferatief effect in MX1-cellen; het remt echter de migratie met 95%.
In Vivo Oraal toegediend Nirogacestat (PF-03084014) in een enkele dosis van 200 mg/kg veroorzaakt een maximale NICD-remming van ~80% in xenograft HPB-ALL-tumoren. Het vertoont een robuuste antitumoractiviteit in deze modus met een maximale tumorgroei-remming van ~92% bij een dosis van 150 mg/kg, vergezeld van een significante vermindering van NICD/Notch1, tumor mitotische index (Ki67) en apoptosis (geactiveerde caspase-3) kleuring. Bij 120 mg/kg induceert deze verbinding apoptosis, antiproliferatie, vermindert de zelfvernieuwingscapaciteit van tumorcellen, vermindert de tumorvasculatuur en vermindert de metastase-activiteit bij borstkanker HCC1599-tumor-dragende muizen. De behandeling vertoont een significante antitumoractiviteit in verschillende typen van de borstxenograft-modellen met een TGI-waarde van ten minste 50%.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[3]
  • γ-secretase test

    Een DNA-fragment dat aminozuren 596 - 695 van de 695-aa-isoform van APP (APP695) en de Flag-sequentie (DYKDDDDK) aan de C-terminus codeert, wordt gegenereerd door PCR-amplificatie met geschikt ontworpen oligonucleotiden en het APP695-cDNA. De Met die dient als de translatie-startplaats is residu 596 van APP695 (het P1-residu met betrekking tot de β-secretase-splitsingsplaats). Dit DNA-fragment wordt ingebracht in het prokaryote expressievector pET2-21b. Het recombinante eiwit, C100Flag, wordt overgeproduceerd in Escherichia coli [stam BL21(DE3)] en gezuiverd door Mono-Q-kolomchromatografie. C100Flag (1,7 μM) wordt geïncubeerd met celmembranen (0,5 mg/mL) in aanwezigheid van CHAPSO, CHAPS (3-[(3-cholamidopropyl)dim-ethylammonio]-1-propanesulfonaat) of Triton X-100 (0, 0,125, 0,25, 0,5 of 1%) in buffer B (50 mM Pipes, pH 7,0y 5mM MgCl2/5 mM CaCl2/150 mM KCl) bij 37°C. De reacties worden gestopt door toevoeging van RIPA (150 mM NaCl/1,0% NP-40/0,5% natriumdeoxycholaaty 0,1% SDS/50 mM Tris HCl, pH 8,0) en 5 min koken. De monsters worden gecentrifugeerd en de supernatantoplossingen worden geanalyseerd op de Aβ-peptiden door ECL. De Aβ40- en Aβ42-gerelateerde producten van γ-secretase-gemedieerde verwerking van C100Flag bezitten een Met aan de N-terminus en worden aldus respectievelijk gedefinieerd als M-Aβ40 en M-Aβ42. Op dezelfde manier wordt de supernatantoplossing (0,125 mg/mL) van CHAPSO-geëxtraheerde HeLa-celmembranen (gesolubiliseerde γ-secretase) geïncubeerd met C100Flag (1,7 μM) in buffer B die 0,25% CHAPSO bevat en vervolgens geanalyseerd op M-Aβ40 en M-Aβ42 met behulp van ECL. Deze verbinding, Nirogacestat (PF-03084014), wordt gebruikt in de experimentele context.
Celassay:[1]
  • Cellijnen

    Human T-ALL cell lines HPB-ALL

  • Concentraties

    ~1 μM

  • Incubatietijd

    7 days

  • Methode

    Cells are seeded in 96-well plates at 10,000 cells/well in growth media supplemented with 10% fetal bovine serum. Serial dilutions of Nirogacestat (PF-03084014) are done in DMSO, appropriate controls or designated concentrations of this compound are added to each well, and cells are incubated at 37℃ for 7 days (final DMSO content 0.1%). Resazurin at a final concentration of 0.1 mg/mL is added to the cells and plates are incubated for 2 to 4 hours. Fluorescent signals are read as emission at 590 nm after excitation at 560 nm.
Dierstudie:[1]
  • Dierlijke modellen

    Human T-cell acute lymphoblastic leukemia xenografts HPB-ALL

  • Doseringen

    150 mg/kg

  • Toediening

    p.o. twice daily

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20530712/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22806875/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/10801983/

Klantproductvalidatie

The expression of p-EGFR and NICD was assessed by western blot after treatment for 3 d.

Gegevens van [ , , Cell Prolif, 2018, 51(3):e12424 ]

(F) Tumour tissues were further analysed to detect the efficacy of the inhibitors by IHC staining using p-EGFR and Notch1. (4Fa) Notch1 staining was mostly confined on the cell membrane. (4Fc) After Erlotinib treatment, the Notch1 protein was cleaved and translocated to the nucleus. (4Fb) p-EGFR was overexpressed in the control group. (4Fd) Erlotinib treatment inhibited p-EGFR expression. (4Fe-f) PF-03084014 treatment reduced both Notch1 and p-EGFR expression. (4Fg-h) Synthetic therapy reduced the activation of Notch1 and EGFR pathway. Scale bar = 50 μm. *P < .05, **P < .01, ***P < .001

Gegevens van [ , , Cell Prolif, 2017, doi: 10.1111/cpr.12424 ]

Sellecks Nirogacestat (PF-03084014) Is geciteerd door 21 Publicaties

Calorie restriction activates a gastric Notch-FOXO1 pathway to expand ghrelin cells [ J Cell Biol, 2024, 223(10)e202305093] PubMed: 38958606
Activation of the γ-secretase/NICD-PXR/Notch pathway induces Taxol resistance in triple-negative breast cancer [ Biochem Pharmacol, 2024, 230(Pt 2):116577] PubMed: 39427919
Multiomic analyses reveal new targets of polycomb repressor complex 2 in Schwann lineage cells and malignant peripheral nerve sheath tumors [ Neurooncol Adv, 2024, 6(1):vdae188] PubMed: 39620202
Inhibition of Notch Signaling Enhances Antitumor Activity of Histone Deacetylase Inhibitor LAQ824 [ Int J Mol Sci, 2023, 24(17)13660] PubMed: 37686467
Simultaneous Inhibition of Ceramide Hydrolysis and Glycosylation Synergizes to Corrupt Mitochondrial Respiration and Signal Caspase Driven Cell Death in Drug-Resistant Acute Myeloid Leukemia [ Cancers (Basel), 2023, 15(6)1883] PubMed: 36980769
In vitro effects of gamma-secretase inhibition in HPV-positive and HPV-negative head and neck squamous cell carcinoma [ Invest New Drugs, 2023, 41(2):193-201] PubMed: 36809443
Pharmacological conversion of gut epithelial cells into insulin-producing cells lowers glycemia in diabetic animals [ J Clin Invest, 2022, 132(24)e162720] PubMed: 36282594
DT7 peptide-modified lecithin nanoparticles co-loaded with γ-secretase inhibitor and dexamethasone efficiently inhibit T-cell acute lymphoblastic leukemia and reduce gastrointestinal toxicity [ Cancer Lett, 2022, 533:215608] PubMed: 35240234
BRAFV600E;K601Q metastatic melanoma patient-derived organoids and docking analysis to predict the response to targeted therapy [ Pharmacol Res, 2022, 182:106323] PubMed: 35752358
Chemical induction of gut β-like-cells by combined FoxO1/Notch inhibition as a glucose-lowering treatment for diabetes [ Mol Metab, 2022, 66:101624] PubMed: 36341906

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.