Gegevensblad

Biologische Beschrijving

Specificiteit	Monocyte + Macrophage Antibody [E17C4] detecteert endogene niveaus van het totale Monocyte + Macrophage antigeen. Dit antilichaam herkent een intracellulair antigeen van muismacrofagen en -monocyten. Het reageert sterk met macrofagen in lymfoïde organen bij alle muizenstammen.
Achtergrond	Monocyten en macrofagen zijn essentiële componenten van het aangeboren immuunsysteem en spelen een centrale rol bij het initiëren en coördineren van ontstekingsreacties. Naast het aansturen van de productie van ontstekingsmediatoren en het vormgeven van zowel de aangeboren als de adaptieve immuniteit, zijn ze evenzeer cruciaal bij het oplossen van ontstekingen en het herstellen van weefselhomeostase. Deregulatie van hun functie is daarom een veelvoorkomend kenmerk in de pathogenese van chronische infecties, auto-immuunziekten en ernstige steriele ontstekingsziekten. Monocyten, die 5-10% van de circulerende leukocyten vertegenwoordigen, zijn mononucleaire cellen afkomstig uit het beenmerg met een korte levensduur van 1-3 dagen. Onder stabiele omstandigheden ondersteunen ze de homeostase en behouden ze het vermogen om te differentiëren tot weefselmacrofagen. Tijdens ontsteking worden monocyten actief gerekruteerd naar getroffen plaatsen, waar ze differentiëren tot inflammatoire macrofagen of dendritische cellen. Macrofagen zijn verspreid over alle weefsels van het lichaam en vertonen een opmerkelijke functionele heterogeniteit. Ze zijn onmisbaar voor weefselontwikkeling, immuunbewaking en het handhaven van lokale homeostase. Veel macrofaagpopulaties worden tijdens de embryogenese tot stand gebracht, afkomstig van dooierzak- of foetale levervoorlopers, en kunnen onder normale omstandigheden onafhankelijk van monocytenaanvulling persisteren. Daarentegen worden macrofagen in weefsels zoals de huid, het hart en de darm aanvankelijk gezaaid door embryonale voorlopers, maar worden ze na de geboorte snel vervangen door monocyten afkomstig van hematopoëtische stamcellen. Belangrijk is dat weefselresidente macrofagen zowel proliferatieve capaciteit als zelfvernieuwingspotentieel bezitten. De activering en polarisatie van zowel monocyten als macrofagen worden geactiveerd door hun herkenning van pathogeen-geassocieerde of schade-geassocieerde moleculaire patronen (PAMP's en DAMP's) via patroonherkenningsreceptoren (PRR's), waardoor ze hun responsen kunnen aanpassen aan een breed scala van fysiologische en pathologische signalen.

Specificiteit

Monocyte + Macrophage Antibody [E17C4] detecteert endogene niveaus van het totale Monocyte + Macrophage antigeen. Dit antilichaam herkent een intracellulair antigeen van muismacrofagen en -monocyten. Het reageert sterk met macrofagen in lymfoïde organen bij alle muizenstammen.

Achtergrond

Monocyten en macrofagen zijn essentiële componenten van het aangeboren immuunsysteem en spelen een centrale rol bij het initiëren en coördineren van ontstekingsreacties. Naast het aansturen van de productie van ontstekingsmediatoren en het vormgeven van zowel de aangeboren als de adaptieve immuniteit, zijn ze evenzeer cruciaal bij het oplossen van ontstekingen en het herstellen van weefselhomeostase. Deregulatie van hun functie is daarom een veelvoorkomend kenmerk in de pathogenese van chronische infecties, auto-immuunziekten en ernstige steriele ontstekingsziekten. Monocyten, die 5-10% van de circulerende leukocyten vertegenwoordigen, zijn mononucleaire cellen afkomstig uit het beenmerg met een korte levensduur van 1-3 dagen. Onder stabiele omstandigheden ondersteunen ze de homeostase en behouden ze het vermogen om te differentiëren tot weefselmacrofagen. Tijdens ontsteking worden monocyten actief gerekruteerd naar getroffen plaatsen, waar ze differentiëren tot inflammatoire macrofagen of dendritische cellen. Macrofagen zijn verspreid over alle weefsels van het lichaam en vertonen een opmerkelijke functionele heterogeniteit. Ze zijn onmisbaar voor weefselontwikkeling, immuunbewaking en het handhaven van lokale homeostase. Veel macrofaagpopulaties worden tijdens de embryogenese tot stand gebracht, afkomstig van dooierzak- of foetale levervoorlopers, en kunnen onder normale omstandigheden onafhankelijk van monocytenaanvulling persisteren. Daarentegen worden macrofagen in weefsels zoals de huid, het hart en de darm aanvankelijk gezaaid door embryonale voorlopers, maar worden ze na de geboorte snel vervangen door monocyten afkomstig van hematopoëtische stamcellen. Belangrijk is dat weefselresidente macrofagen zowel proliferatieve capaciteit als zelfvernieuwingspotentieel bezitten. De activering en polarisatie van zowel monocyten als macrofagen worden geactiveerd door hun herkenning van pathogeen-geassocieerde of schade-geassocieerde moleculaire patronen (PAMP's en DAMP's) via patroonherkenningsreceptoren (PRR's), waardoor ze hun responsen kunnen aanpassen aan een breed scala van fysiologische en pathologische signalen.

Gebruiksinformatie

Toepassing

IHC, FCM

Verdunning

Reactiviteit

Mouse

Bron

Rat Monoclonal Antibody

MW

Opslagbuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Opslag
(Vanaf de datum van ontvangst)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentele Methoden
IHC	Experimental Protocol： Deparaffinization/Rehydration 1. Deparaffinize/hydrate sections: 2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each. 3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each. 4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each. 5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each. 6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min. Staining 1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each. 2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min. 3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 4. Wash sections in wash buffer for 5 min. 5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature. 6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C. 7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each. 8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature. 9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each. 10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use. 11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity. 12. Immerse slides in dH2O. 13. If desired, counterstain sections with hematoxylin. 14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each. 15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each. 16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Experimentele Methoden

IHC

Experimental Protocol：

Deparaffinization/Rehydration

1. Deparaffinize/hydrate sections:

2. Incubate sections in three washes of xylene for 5 min each.

3. Incubate sections in two washes of 100% ethanol for 10 min each.

4. Incubate sections in two washes of 95% ethanol for 10 min each.

5. Wash sections two times in dH2O for 5 min each.

6.Antigen retrieval: For Citrate: Heat slides in a microwave submersed in 1X citrate unmasking solution until boiling is initiated; continue with 10 min at a sub-boiling temperature (95°-98°C). Cool slides on bench top for 30 min.

Staining

1. Wash sections in dH2O three times for 5 min each.

2. Incubate sections in 3% hydrogen peroxide for 10 min.

3. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

4. Wash sections in wash buffer for 5 min.

5. Block each section with 100–400 µl of blocking solution for 1 hr at room temperature.

6. Remove blocking solution and add 100–400 µl primary antibody diluent in to each section. Incubate overnight at 4°C.

7. Remove antibody solution and wash sections with wash buffer three times for 5 min each.

8. Cover section with 1–3 drops HRPas needed. Incubate in a humidified chamber for 30 min at room temperature.

9. Wash sections three times with wash buffer for 5 min each.

10. Add DAB Chromogen Concentrate to DAB Diluent and mix well before use.

11. Apply 100–400 µl DAB to each section and monitor closely. 1–10 min generally provides an acceptable staining intensity.

12. Immerse slides in dH2O.

13. If desired, counterstain sections with hematoxylin.

14. Wash sections in dH2O two times for 5 min each.

15. Dehydrate sections: Incubate sections in 95% ethanol two times for 10 sec each; Repeat in 100% ethanol, incubating sections two times for 10 sec each; Repeat in xylene, incubating sections two times for 10 sec each.

16. Mount sections with coverslips and mounting medium.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/35741108/

Toepassingsgegevens

IHC

Gevalideerd door Selleck

Immunohistochemical analysis of formalin fixed paraffin embedded mouse carotid artery tissue with F3741 at 1:100 dilution.