GSK3787

GSK3787 antagoniseert irreversibel menselijke en muizen PPARδ die Cys249 covalent modificeert binnen de ligandbindende pocket. Deze verbinding (1 μM) antagoniseert effectief de agonist GW0742 gestimuleerde transcriptie van CPT1a en PDK4 in menselijke skeletspiercellen, en antagoniseert effectief de basale genexpressie van CPT1a. Het vertoont geen effectieve antiproliferatieve activiteit tegen colorectale kankercellen. [1]

Deze chemische stof (1 μM) antagoniseert volledig 50 nM GW0742-geïnduceerde PPARβ/δ-afhankelijke Angptl4-genexpressie in wild-type fibroblasten en in keratinocyten. Het (1 μM) antagoniseert grotendeels 50 nM GW0742-geïnduceerde Angptl4 en Adrp mRNA-expressie in huidkankercel A341. Deze verbinding (1 μM) antagoniseert grotendeels GW0742-geïnduceerde Angptl4 mRNA-expressie in kankercellijnen MCF7 (borst), Huh7 (lever) en HepG2 (lever) cellen, maar niet in H1838 of A549 cellen (long). Het (1 μM) antagoniseert grotendeels GW0742-geïnduceerde toename van Adrp mRNA in Huh7- en HepG2-cellen, maar niet in H1838-cellen. Deze chemische stof antagoniseert de basale expressie van geen van deze twee PPARβ/δtargetgenen in deze cellen. Noch GW0742, noch deze verbinding heeft enig effect op de celproliferatie van deze cellen bij concentraties variërend van 0,1 tot 10 μM. Het is in staat de associatie van zowel PPARβ/δ- als PPARγ-coregulatorpeptiden te moduleren als reactie op ligandactivatie. De werkzaamheid van deze chemische stof om PPARγ-activiteit te moduleren is aanzienlijk lager dan de werkzaamheid ervan om als een PPARβ/δ-antagonist te werken. [2]

GSK3787 antagoniseert ligand-geïnduceerde PPARβ/δ-afhankelijke genexpressie in vivo. Orale toediening van deze verbinding heeft geen effect op de expressie van Angptl4 en Adrp mRNA in muizen colon-epitheel. Gelijktijdige toediening van deze chemische stof (10 mg/kg) voorkomt effectief de GW0742-geïnduceerde expressie van zowel Angptl4 als Adrp mRNA in wild-type muizen colon-epitheel, wat gecorreleerd is met een verminderde promotorbezetting van PPARβ/δ op de Angptl4- en Adrp-genen. Toediening van deze verbinding had geen effect op de glucosetolerantie. [2]

• Verzadigingsbindingsassay

  Met behulp van 96-wells kweekplaten worden 50 nM gezuiverde menselijke PPARG LBD en de gewenste concentratie van [³H]GW3738 verdund tot een totaal volume van 100 μL met buffer bestaande uit 50 mM KCl, 5 mM EDTA, 10 mM dithiothreitol (DTT), 50 mM HEPES, bij pH 7. Verzadigingsbindingsassays worden uitgevoerd met concentraties van deze verbinding variërend van 1 tot 250 nM. Niet-specifieke binding bij elke concentratie van [³H]GW3738 wordt geschat in parallelle incubaties die 50 μM ongelabeld GW 3738 bevatten. Platen worden 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. Vrije ligand wordt gescheiden van receptor-gebonden ligand door middel van grootte-exclusiechromatografie met behulp van commercieel verkrijgbare 96-wells formaat spin columns. Monsters (50 μL) uit elke well van een enkele testplaat worden geladen op een buffer- en temperatuur-geëquilibreerd 96-wells gelfiltratieblok. Het blok wordt bovenop een schone microtiterplaat geplaatst en 4 minuten gecentrifugeerd bij 1100 g. Scintillatievloeistof (180 ul) wordt aan elke well van de plaat met het eluaat toegevoegd, en de platen worden afgedicht en mogen minstens 4 uur equilibreren voordat ze in een teller worden geteld. De hoeveelheid niet-specifieke binding bij elke concentratie van [³H]GW3738 wordt afgetrokken van alle wells en grafieken van de concentratie van deze chemische stof versus gebonden counts per minuut (cpm) worden geconstrueerd. De K_d-waarden voor [³H]GW3738 worden bepaald door een niet-lineaire kleinste-kwadratenfit van de gegevens aan een eenvoudig bindingsmodel.