GSK-J4 Hydrochloride

Catalogusnr.S7070 Batch:S707005

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C24H27N5O2.HCl
Molecuulgewicht 453.96 CAS-nr. 1797983-09-5
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 90 mg/mL (198.25 mM)
Ethanol 90 mg/mL (198.25 mM)
Water 9.4 mg/mL (20.7 mM)
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving GSK J4 HCl is een celpermeabel prodrug van GSK J1, wat de eerste selectieve remmer is van de H3K27 histone demethylase JMJD3 en UTX met een IC50 van 60 nM in een celvrije test en inactief tegenover een panel van demethylasen van de JMJ-familie.
Doelen
JMJD3
(Cell-free assay)
60 nM
In vitro

GSK J4 HCl is een ethylesterderivaat van de JMJD3-selectieve histone demethylase-remmer GSK-J1 met een IC50-waarde groter dan 50 μM in vitro. Deze verbinding wordt gebruikt om de gevolgen van demethylatie van H3K27me3 te onderzoeken. In humane primaire macrofagen remt deze chemische stof de lipopolysaccharide-geïnduceerde productie van cytokinen, waaronder pro-inflammatoir tumornecrosefactor (TNF). Bovendien voorkomt het het lipopolysaccharide-geïnduceerde verlies van H3K27me3 geassocieerd met de TNF-transcriptiestartplaatsen en blokkeert het de rekrutering van RNA-polymerase II.

In Vivo

GSK-J4 hydrochloride is een krachtige dubbele remmer van H3K27me3/me2-demethylasen JMJD3/KDM6B en UTX/KDM6A. Het remt de LPS-geïnduceerde TNF-α productie in humane primaire macrofagen. Deze verbinding is een celpermeabel prodrug van GSK-J1.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • Histone Demethylase AlphaScreen

    Remming van histone demethylasen wordt beoordeeld met behulp van de histone demethylase AlphaScreen-test (Amplified Luminescence Proximity Homogenous Assay). Deze test maakt gebruik van een gebiotinyleerd peptidesubstraat en is gebaseerd op de detectie van het product methylmerk met behulp van een specifieke antilichaam gekoppeld aan proteïne-A-acceptorkralen en een streptavidine-donorkraal om het peptide te vangen. Kortom, recombinante demethylase-enzymen worden geïncubeerd in aanwezigheid van Fe2+ in de vorm van ferroammoniumsulfaat (FAS), α-ketoglutaraat (KG) en gebiotinyleerd peptidesubstraat. L-Ascorbinezuur wordt toegevoegd om een reducerende omgeving te creëren en oxidatie van Fe2+ te voorkomen. Na incubatie met peptidesubstraat wordt de aanwezigheid van het product gedetecteerd met behulp van AlphaScreen-technologie. De demethylase AlphaScreen-testen worden uitgevoerd in een 384-wells plaatformaat met witte proxiplates. Alle stappen worden uitgevoerd in assaybuffer (50 mM HEPES pH 7.5, 0.1% (w/v) BSA en 0.01 % (v/v) Tween-20). FAS wordt dagelijks vers opgelost in 20 mM HCl tot een concentratie van 400 mM en verdund tot 1.0 mM in gedeïoniseerd water. Alle andere componenten worden dagelijks vers opgelost in gedeïoniseerd water. Voor IC50-bepalingen wordt 5 μL assaybuffer met demethylase-enzym overgebracht naar de wells van een 384-wells proxiplate. Titraties van deze verbinding (0.1 μL) worden naar elke well overgebracht en de enzymen mogen gedurende 15 minuten voor-incuberen met deze chemische stof (uiteindelijke concentratie DMSO is 1%). De enzymreactie wordt geïnitieerd door toevoeging van 5 μL van een substraatmix bestaande uit α-KG, FAS, L-Ascorbinezuur en gebiotinyleerd peptidesubstraat en de reactie wordt gedurende de aangegeven tijd bij kamertemperatuur geïncubeerd. De enzymreactie wordt na de aangegeven tijd gestopt door toevoeging van 5 μL EDTA (7.5 mM eindconcentratie in assaybuffer). Streptavidine-donorkralen (0.08 mg/ml) en proteïne-A-geconjugeerde acceptorkralen (0.08 mg/ml) worden 1 uur voor-geïncubeerd met een antilichaam tegen het product methylmerk en de aanwezigheid van biotine-H3-product wordt gedetecteerd door toevoeging van 5 μL van de voor-geïncubeerde AlphaScreen-kralen (eindconcentraties van 0.02 mg/ml met betrekking tot acceptor- en donorkralen). De detectie mag 1 uur bij kamertemperatuur doorgaan en de assayplaten worden afgelezen in een BMG Labtech Pherastar FS plaatlezer. Gegevens worden genormaliseerd naar de geen-enzymcontrole en de IC50 wordt bepaald uit de niet-lineaire regressiecurve-fit met behulp van GraphPad Prism 5.
Celassay:

[2]
  • Cellijnen

    Mouse podocytes

  • Concentraties

    5 μM

  • Incubatietijd

    48 h

  • Methode

    Cells were serum starved for 4 hours, followed by treatment with EPZ-6438 (10 μM) or this compound (5 μM) for 48 hours.
Dierstudie:

[2]
  • Dierlijke modellen

    BALB/c mice

  • Doseringen

    10 mg/kg

  • Toediening

    i.p.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22842901/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29227285/

Klantproductvalidatie

<p>DIPG cells were seeded into 96-well plates and treated with panobinostat and GSK-J4 individually or in combination at the indicated concentrations for 72 hr in at least triplicate. Cell viabilities were then assessed using the CelltiterGlo assay relative to 0.1% DMSO control. Data shown as mean ± SD. *indicates the two drugs demonstrate synergy at that condition (i.e. CI < 1).</p>

, , Nat Med, 2015, 21(6):555-9.

<p>GSK-J4 impaired hair cell regeneration after neomycin damage. (A–D) GSK-J4 reduced the numbers of GFP-positive (green) and FM1-43FX-positive (red) hair cells compared with DMSO-treated controls. Scale bars = 10 μm. (E,F) Quantitative analysis of the number of GFP-positive (E) or FM1-43FX-positive (F) hair cells per neuromast (NM) at different time points in DMSO-treated control and GSK-J4-treated larvae. In the 24-h group, n = 40 neuromasts (20 larvae) per group; in the 48-h group, n = 28 neuromasts (14 larvae) per group. ***p < 0.0001. Bars are mean ± sem. [24-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 117) = 96.94; FM1-43FX-positive cells: F(2, 117) = 114. 48-h group: One-way ANOVA; GFP-positive cells: F(2, 81) = 88.96; FM1-43FX-positive cells: F(2, 81) = 93.85].</p>

, , Front Mol Neurosci, 2017, doi: 10.3389/fnmol.2017.00051

Inhibition of JMJD3 mitigated the IL-1β-induced inflammatory response in the MH7A cells. The MH7A cells were transfected with control or JMJD3 siRNA or treated with the indicated concentrations of GSK-J4 (JMJD3 inhibitor) and were then stimulated with IL-1β for 24 h. Western blot analysis of JMJD3, TLR2, COX-2 and GAPDH expression (d).

Gegevens van [ , , Cell Mol Immunol, 2018, doi:10.1038/s41423-018-0037-8 ]

GSK J4 inhibited PDGF-induced cyclin D1 and PCNA expression. The cells were preincubated for 4 h, with or without 10 mM GSK J4, followed by stimulation with 25 ng/ml PDGF-BB for 36 h. Cells were immunostained with anti-JMJD3 antibodies (green), and nuclei were stained with DAPI (blue) and analyzed by fluorescence microscopy.

Gegevens van [ , , FASEB J, 2018, 32(7):4031-4042 ]

Sellecks GSK-J4 Hydrochloride Is geciteerd door 65 Publicaties

HIF-independent oxygen sensing via KDM6A regulates ferroptosis [ Mol Cell, 2025, 85(15):2973-2987.e6] PubMed: 40712585
Loss of Kmt2c or Kmt2d drives brain metastasis via KDM6A-dependent upregulation of MMP3 [ Nat Cell Biol, 2024, 26(7):1165-1175] PubMed: 38926506
Evi1 governs Kdm6b-mediated histone demethylation to regulate the Laptm4b-driven mTOR pathway in hematopoietic progenitor cells [ J Clin Invest, 2024, 134(24)e173403] PubMed: 39680456
Targeting lysine demethylase 6B ameliorates ASXL1 truncation-mediated myeloid malignancies in preclinical models [ J Clin Invest, 2024, 134(1)e163964] PubMed: 37917239
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):528] PubMed: 39482699
Dual targeting of histone deacetylases and MYC as potential treatment strategy for H3-K27M pediatric gliomas [ Elife, 2024, 13RP96257] PubMed: 39093942
Prenatal dexamethasone exposure reduces osteoprogenitor proliferation in mice via histone modifications at the Mkp-1 gene locus [ Commun Biol, 2024, 7(1):1589] PubMed: 39609620
Targeting histone demethylases JMJD3 and UTX: selenium as a potential therapeutic agent for cervical cancer [ Clin Epigenetics, 2024, 16(1):51] PubMed: 38576048
miRNA-27a-3p is involved in the plasticity of differentiated hepatocytes [ Gene, 2024, 913:148387] PubMed: 38499211
Refractory testicular germ cell tumors are highly sensitive to the targeting of polycomb pathway demethylases KDM6A and KDM6B [ Res Sq, 2024, rs.3.rs-4986186] PubMed: 39483904

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.