Fostamatinib disodium hexahydrate

R788 is een prodrug van de milt tyrosinekinase (Syk) remmer R406. R788 is een competitieve remmer voor ATP-binding met een Ki van 30 nM. R788 remt dosisafhankelijk anti-IgE-gemedieerde CHMC degranulatie met een EC50 van 56 nM. R788 remt ook de anti-IgE-geïnduceerde productie en afgifte van LTC4 en cytokinen en chemokinen, waaronder TNFα, IL-8 en GM-CSF. Remming van Syk door R788 resulteert in remming van alle fosforyleringsgebeurtenissen stroomafwaarts van Syk-signalering. Naast FcϵRI-signalering in CHMC remt R788 het meest potent de signalering van IL-4- en IL-2-receptoren. R788 remt specifiek FcγR-signalering in humane mestcellen, macrofagen en neutrofielen. R788 kan lokale ontstekingsschade door immuuncomplexen remmen.[1] R788 induceert apoptose van de meerderheid van de onderzochte DLBCL-cellijnen. In R788-gevoelige DLBCL-cellijnen remt R788 specifiek zowel tonische- als ligand-geïnduceerde BCR-signalering (autofosforylering van SYK525/526 en SYK-afhankelijke fosforylering van het B-cel linkerproteïne [BLNK]).[2]

Orale toediening van R788 aan muizen vermindert immuuncomplex-gemedieerde ontsteking in een omgekeerde passieve Arthus-reactie en twee antilichaam-geïnduceerde artritismodellen.[1] In een andere studie remt R788 effectief de BCR-signalering in vivo, wat resulteert in verminderde proliferatie en overleving van de maligne B-cellen en verlengt het de overleving van de behandelde dieren aanzienlijk.[3] R788 toont een significante vermindering van belangrijke ontstekingsmediatoren zoals TNFalpha, IL-1, IL-6 en IL-18, wat leidt tot verminderde ontsteking en botafbraak in modellen van reumatoïde artritis.[4]

• Fluorescentiepolarisatie-kinase-analyse en Ki-bepaling

  De fluorescentiepolarisatiereacties worden uitgevoerd. Voor K_i-bepaling worden dubbele 200 μL-reacties opgesteld bij acht verschillende ATP-concentraties van 200 μM (2-voudige seriële verdunningen) in aanwezigheid van ofwel DMSO of R788 bij 125, 62,5, 31,25, 15,5 of 7,8 nM. Op verschillende tijdstippen wordt 20 μL van elke reactie verwijderd en geblust om de reactie te stoppen. Voor elke concentratie van R788 wordt de reactiesnelheid bij elke concentratie van ATP bepaald en uitgezet tegen de ATP-concentratie om de schijnbare K_m en V_max te bepalen. Tenslotte wordt de schijnbare K_m (of schijnbare K_i/V_max) uitgezet tegen de remmerconcentratie om de K_i te bepalen.

• Cellijnen

  Cultured human mast cells (CHMC)

• Concentraties

  0-100 μM

• Incubatietijd

  0.5 h

• Methode

  Cultured human mast cells (CHMC) are derived from cord blood CD34⁺ progenitor cells and grown, primed, and stimulated and shown in supplemental data. Before stimulation, cells are incubated with R788 or DMSO for 30 minutes. Cells are then stimulated with either 0.25 to 2 mg/mL anti-IgE or anti-IgG or 2 μM ionomycin. For tryptase measurement, ~1500 cells per well are stimulated for 30 min in modified Tyrode's buffer. For LTC4 and cytokine production, 100,000 cells per well are stimulated for 1 or 7 hours, respectively. Tryptase activity is measured by luminescence readout of a peptide substrate, and LTC4 and cytokines are measured using Luminex multiplex technology.

• Dierlijke modellen

  Balb/c mice with arthritis

• Doseringen

  1 mg/kg or 5 mg/kg

• Toediening

  o.g.