Etoposide

Etoposide remt de DNA-synthese door een complex te vormen met topoisomerase II en DNA, wat breuken in dubbelstrengs-DNA induceert en herstel door topoisomerase II-binding voorkomt. Geaccumuleerde breuken in DNA voorkomen de toegang tot de mitotische fase van celdeling en leiden tot celdood. Deze verbinding werkt voornamelijk in de G2- en S-fasen van de celcyclus. [1] Het remt de groei van murien angiosarcoom-cellijn (ISOS-1) in een periode van 5 dagen met een IC50 van 0,25 μg/mL. Celgroei van normale murien microvasculaire endotheelcellen (mECs) is minder gevoelig voor deze chemische stof met een IC50 van 10 μg/mL). [2] Dit middel, gedurende 6 uur behandeld, remt kolonies van tetraploïde variant van de menselijke leukemische lymfoblastenlijn CCRF-CEM met een IC50 van 0,6 μM. [3] Het, gedurende 2 uur behandeld, remt de groei van menselijke pancreaskankercellijnen Y1, Y3, Y5, Y19, YM. YS en YT met IC50s van respectievelijk 300 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL, 91 μg/mL, 0,68 μg/mL, 300 μg/mL, 300 μg/mL en 260 μg/mL. [4] Deze verbinding, gedurende 1 uur blootgesteld, remt de groei van menselijke glioomcellijnen CL5, G142, G152, G111 en G5 met IC50 van respectievelijk 8, 9, 9,8, 10 en 15,8 μg/mL gedurende 12 dagen. Onder dezelfde omstandigheden wordt de IC90-waarde bereikt in cellijnen CL5, G152, G142 en G111 bij 26, 27, 32 en 33 μg/mL. De remming van topoisomerase II is homogeen voor elke cel. De gemiddelde remmingspercentages zijn 15%, 21,8%, 31,8%, 41,5% en 49,5% voor respectievelijk 1, 2, 4, 8 en 16 μg van dit middel. [5]

Etoposide, toegediend als een enkelvoudig middel, bleek ineffectief te zijn bij de groei van veel xenografts, zoals Heterotransplanted Hepatoblastoma NMHB1 en NMHB2, [6] menselijk neuroblastoom xenograft, [7] en menselijk gastro-intestinaal kanker xenograft, [8] terwijl de dosis van 10 mg/kg i.p. van deze verbinding murine angiosarcoomcel ISOS-1 tumoren remt in 36% van de controles. [2] Deze chemische stof induceert tumorimmuniteit bij Lewis longkanker. Een enkelvoudige toediening van 50 mg/kg van dit middel i.p. induceert een overleving van 60% van C57B1/6 muizen geïnjecteerd met Lewis longkankercellen (3LL) gedurende 60 dagen. Ongeveer 40% van deze overlevende muizen verwerpt een daaropvolgende uitdaging met 3LL, terwijl geen van de controlemuizen langer dan 30 dagen overleeft. 3LL-cellen die een 90% letale concentratie van deze verbinding in vitro hebben overleefd, doden 75% van de ontvangende muizen, maar 60% van de overlevende muizen verwerpt een uitdaging met 3LL. Splenocyten geoogst van tumorafstotende muizen beschermen naïeve muizen geïnjecteerd met 3LL. [9]

• Topoisomerase II activiteitsassay

  Nucleaire extracten worden bereid en kernen worden geïsoleerd. De activiteit van topoisomerase II wordt berekend uit het verkregen percentage decatenatie. Getritieerd kinoplast-DNA (KDNA 0,22 μg) wordt gebruikt als substraat. Etoposide en topoisomerase II worden 30 min geïncubeerd bij 37 ℃ en gestopt met 1% natriumdodecylsulfaat (SDS) en proteinase K (100 μg/mL). De percentages decatenatie en remming van topoisomerase II door deze verbinding worden verkregen.

• Cellijnen

  Human glioma cell lines CL5

• Concentraties

  80 μg/mL

• Incubatietijd

  1 hour

• Methode

  After the Etoposide treatment, cells are removed from the dish with phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.03% trypsin and 0.27 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and are diluted into culture dishes in appropriate numbers to yield between 20 and 200 colonies. After 12 days, cultures are fixed with methanol-acetic acid, stained with crystal violet, and scored for colonies containing more than 50 cells. The standard errors are typically less than 15% of the mean value unless otherwise stated.

• Dierlijke modellen

  Murine angiosarcoma xenografts ISOS-1

• Doseringen

  10 mg/kg

• Toediening

  i.p. every day for 5 days from day 7