Erlotinib (CP-358774)

Erlotinib HCl remt krachtig de EGFR-activering in intacte cellen, waaronder menselijke HNS hoofd- en nektumorcellen (IC50 20nM), DiFi menselijke darmkankercellen en MDA MB-468 menselijke borstkankercellen. Deze verbinding (1 μM) induceert apoptose in DiFi menselijke darmkankercellen. [1] Het remt de groei van een reeks NSCLC-cellijnen, waaronder A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 met IC50 variërend van 29 nM tot >20 μM. [2] Deze chemische stof (2 μM) remt significant de groei van AsPC-1 en BxPC-3 pancreascellen. [3] De effecten van deze verbinding in combinatie met gemcitabine worden als additief beschouwd in KRAS-gemuteerde pancreaskankercellen. Tien micromolair van deze chemische stof remt EGFR-fosforylatie op de Y845 (Src-afhankelijke fosforylatie) en Y1068 (autofosforylatie) sites. [4] Combinatie met deze verbinding kan de rapamycine-gestimuleerde Akt-activiteit down-moduleren en produceert een synergetisch effect op de remming van celgroei. [5]

Bij doses van 100 mg/kg voorkomt Erlotinib HCl volledig de EGF-geïnduceerde autofosforylatie van EGFR in menselijke HN5-tumoren die groeien als xenografts in athymische muizen en van de hepatische EGFR van de behandelde muizen. [1] Deze verbinding (100 mg/Kg) remt H460a en A549 tumormodellen met een remmingspercentage van 71 en 93%. [5]

• Kinase assays

  96-wells platen worden gecoat door incubatie gedurende de nacht bij 37 °C met 100 μL per well van 0,25 mg/mL PGT in PBS. Overtollig PGT wordt verwijderd door aspiratie, en de plaat wordt 3 keer gewassen met wasbuffer (0,1% Tween 20 in PBS). De kinase reactie wordt uitgevoerd in 50 μL van 50 mM HEPES (pH 7,3), bevattende 125 mM natriumchloride, 24 mM magnesiumchloride, 0,1 mM natriumorthovanadaat, 20 μM ATP, 1,6 μg/mL EGF, en 15 ng van EGFR, affiniteitsgezuiverd uit A431 celmembranen. Erlotinib HCl in DMSO wordt toegevoegd om een uiteindelijke DMSO-concentratie van 2,5% te verkrijgen. Fosforylering wordt geïnitieerd door toevoeging van ATP en voortgezet gedurende 8 minuten bij kamertemperatuur, met constant schudden. De kinase reactie wordt beëindigd door aspiratie van het reactiemengsel en wordt 4 keer gewassen met wasbuffer. Gefosforyleerd PGT wordt gemeten door 25 minuten incubatie met 50 μL per well HRP-geconjugeerde PY54 anti-fosfotyrosine antilichaam, verdund tot 0,2 μg/mL in blokkeerbuffer (3% BSA en 0,05% Tween 20 in PBS). Antilichaam wordt verwijderd door aspiratie, en de plaat wordt 4 keer gewassen met wasbuffer. Het colorimetrische signaal wordt ontwikkeld door toevoeging van TMB Microwell Peroxidase Substrate, 50 μL per well, en gestopt door toevoeging van 0,09 M zwavelzuur, 50 μL per well. Fosfotyrosine wordt geschat door meting van de absorptie bij 450 nm. Het signaal voor controles is typisch 0,6-1,2 absorptie-eenheden, met in essentie geen achtergrond in wells zonder AlP, EGFR, of PGT en is proportioneel met de incubatietijd gedurende 10 minuten.

• Cellijnen

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Concentraties

  30 nM-20 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Dierlijke modellen

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Doseringen

  50 mg/kg

• Toediening

  Oral administration