GSK1349572 (Dolutegravir)

Dolutegravir (GSK1349572) vertoont een potent remmend effect op negen klinische isolaten van integrase-remmer-naïeve HIV-2-geïnfecteerde patiënten met EC50 variërend van 0,2 nM tot 1,4 nM.[1]

In vitro remt het de recombinant HIV-1 integrase-gekatalyseerde strengoverdracht met een IC50 van 2,7 nM. Bovendien remt deze verbinding potent de HIV-replicatie in cellen zoals perifere bloedmononucleaire cellen (PBMC's), MT-4-cellen en CIP4-cellen geïnfecteerd met een zelf-inactiverende PHIV-lentivirale vector, met EC50-waarden van respectievelijk 0,51 nM, 0,71 nM en 2,2 nM.[2]

In vitro vertoont het ook potente activiteit tegen vijf verschillende niet-nucleoside reverse transcriptase-remmer-resistente of nucleoside reverse transcriptase-remmer-resistente virussen, met EC50 variërend van 1,3 nM tot 2,1 nM. Vergelijkbaar met zijn activiteit tegen wild-type virus, vertoont het een equivalente werkzaamheid tegen twee protease-remmer-resistente virussen, met EC50-waarden van respectievelijk 0,36 nM en 0,37 nM.[2]

Dolutegravir (GSK1349572), een eerstelijns antiretroviraal geneesmiddel (ARV) dat wordt gebruikt in combinatie-therapie voor HIV-1, remt de MMP-activiteit en heeft het potentieel om de prenatale en postnatale neuro-ontwikkeling te beïnvloeden.

• In vitro strengoverdrachtstest

  De remmende potenties van Dolutegravir (GSK1349572) en andere INI's worden gemeten in een strengoverdrachtstest met recombinant HIV Integrase. Een complex van Integrase en gebiotinyleerd voorbewerkt donor-DNA-streptavidine-gecoate scintillator-nabijheidsassay (SPA)-kralen wordt gevormd door 2 μM gezuiverd recombinant Integrase te incuberen met 0,66 μM gebiotinyleerd donor-DNA-4 mg/mL streptavidine-gecoate SPA-kralen in 25 mM natrium-morfolinepropaansulfonzuur (MOPS) (pH 7,2), 23 mM NaCl en 10 mM MgCl₂ gedurende 5 minuten bij 37 °C. Deze kralen worden gecentrifugeerd en voorgeïncubeerd met verdunde INI's gedurende 60 minuten bij 37 °C. Vervolgens wordt een ₃H-gelabeld doel-DNA-substraat toegevoegd om een uiteindelijke concentratie van 7 nM substraat te verkrijgen, en het strengoverdrachtreactiemengsel wordt geïncubeerd bij 37 °C gedurende 25 tot 45 minuten, wat een lineaire toename van de strengoverdracht van donor-DNA naar radiogelabeld doel-DNA mogelijk maakt. Het signaal wordt afgelezen met behulp van een Wallac MicroBeta scintillatieplaatlezer.

• Cellijnen

  MT-4

• Concentraties

  0 to 10 μM

• Incubatietijd

  4 days or 5 days

• Methode

  Exponentially growing MT-4 cells at a density of 500,000 or 600,000/mL are infected with HIV-1 strain IIIB at a viral multiplicity of infection of 0.001 or a 50% tissue culture infective dose of 4 to 10. The cells are then aliquoted to 96-well plates in the presence of varying concentrations of Dolutegravir (GSK1349572). After incubation for 4 or 5 days, antiviral activity is determined by a cell viability assay that either measured bioluminescence with a CellTiter-Glo luminescent reagent or measured absorbance at 560 and 690 nm using the yellow tetrazolium MTT reagent [3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide].

• Dierlijke modellen

  C3H/HeJ mice

• Doseringen

  50 mg/kg

• Toediening

  o.g.