AZD5363 (Capivasertib)

Capivasertib (AZD5363) is een potente Akt-remmer met IC50 van respectievelijk 3 nM, 8 nM en 8 nM voor Akt1, Akt2 en Akt3. [1] Het remt de fosforylering van AKT-substraten in cellen met een potentie van ongeveer 0,3 tot 0,8 μM. Deze verbinding remt de proliferatie van 41 van de 182 solide en hematologische tumorzellijnen met een potentie van < 3 μM. [2] Activerende mutaties in PIK3CA, verlies of inactivatie van tumorsuppressor PTEN, of HER2-amplificatie zijn allemaal significant voorspellend voor de responsiviteit op AZD5363. Bovendien wordt er ook een correlatie waargenomen tussen de RAS-mutatiestatus van cellijnen en resistentie hiertegen. [1]

Orale toediening van Capivasertib (AZD5363) (100, 300 mg/kg) aan naakte muizen veroorzaakt dosis- en tijdafhankelijke vermindering van PRAS40-, GSK3β- en S6-fosforylering in BT474c-xenografts, omkeerbare verhogingen van bloedglucoseconcentraties en dosisafhankelijke dalingen van de 2[¹⁸F]fluoro-2-deoxy-d-glucose (¹⁸F-FDG)-opname in U87-MG-xenografts. Chronische orale toediening van deze verbinding (130, 200 en 300 mg/kg) veroorzaakt dosisafhankelijke groeiremming van xenografts afkomstig van verschillende tumorsoorten, waaronder HER2+-borstkankermodellen.

• Caliper Off-Chip Incubation Mobility Shift assay

  Het vermogen van Capivasertib (AZD5363) en andere verbindingen om de activiteit van AKT1, AKT2 en AKT3 te remmen, wordt geëvalueerd met behulp van de Caliper Off-Chip Incubation Mobility Shift assay. Actieve recombinante AKT1, AKT2 of AKT3 worden geïncubeerd met een 5-FAM-gelabeld, op maat gesynthetiseerd peptidesubstraat, samen met toenemende concentraties van deze verbinding. De uiteindelijke reacties bevatten 1 tot 3 nM AKT1, AKT2 of AKT3 enzymen; 1,5 mM peptidesubstraat; ATP op K _m voor elke AKT-isoform; 10 mM MgCl₂, 4 mM DTT, 100 mM HEPES en 0,015% Brij-35. De reacties worden gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd en gestopt door de toevoeging van een buffer die 100 mM HEPES, 0,015% Brij-35-oplossing, 0,1% coatingreagens, 40 mM EDTA en 5% DMSO bevat. Platen worden vervolgens geanalyseerd met behulp van een Caliper LC3000, waardoor scheiding van peptidesubstraat en gefosforyleerd product mogelijk is door elektroforese met daaropvolgende detectie en kwantificering van laser-geïnduceerde fluorescentie.

• Cellijnen

  182 solid and hematologic tumor cell lines

• Concentraties

  ~30 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cell proliferation assay is determined by 2 methods, MTS and Sytox Green, using Capivasertib (AZD5363). Briefly, cells are seeded in 96-well plates and incubated overnight at 37 ℃, 5% CO₂. Cells are then exposed to concentrations of this compound ranging from 30 to 0.003μM for 72 hours. For the MTS endpoint, cell proliferation is measured by the CellTiter AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay reagent in accordance with the manufacturer's protocol. For the Sytox Green endpoint, Sytox Green nucleic acid dye diluted in TBS-EDTA buffer is added to cells (final concentration of 0.13 μM) and the number of dead cells detected using an Acumen Explorer. Cells are then permeabilized by the addition of saponin (0.03% final concentration, diluted in TBS-EDTA buffer), incubated overnight and a total cell count measured. Predose measurements are made for both MTS and Sytox Green endpoints, and concentration needed to reduce the growth of treated cells to half that of untreated cells values are determined using absorbance readings (MTS) or live cell counts.

• Dierlijke modellen

  Female nude mice and male SCID mice with BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 xenografts.

• Doseringen

  130 mg/Kg - 300 mg/Kg

• Toediening

  p.o.