Copanlisib (BAY 80-6946)

In zowel KPL4-cellen als LPA-gestimuleerde PC3-cellen vermindert BAY 80-6946 de pAKT-niveaus. In een subset van menselijke kankercellijnen met PIK3CA-mutaties en/of overexpressie van HER2, toont BAY 80-6946 antiproliferatieve activiteit en induceert het apoptose. [1] De combinatie van HER2-gerichte therapieën en BAY 80-6946 remt de groei effectiever dan elke therapie afzonderlijk, en kan de gevoeligheid voor trastuzumab en lapatinib in cellen herstellen. [2]

In rat KPL4 of HCT116 tumor xenograft model, BAY 80-6946 (6 mg/kg, i.v.) induceert 100% volledige tumor regressie. In naakte muizen met Lu7860 erlotinib-resistent, patiënt-afgeleid NSCLC en MAXF1398 patiënt-afgeleide luminale borsttumormodellen, veroorzaakt BAY 80-6946 (14 mg/kg, i.v.) ook tumorgroei-inhibitie. [1]

• Biochemische lipidkinase-assays

  Het effect van BAY 80-6946 op PI3Kα-, PI3Kβ- en PI3Kγ-activiteit wordt gemeten door de remming van ³³P-incorporatie in fosfatidylinositol (PI) in 384-well MaxiSorp®-platen gecoat met 2 µg/well PI en fosfatidylserine (PS) (1:1 molaire verhouding). In elke PI3K-isoform assay wordt 9 µL reactiebuffer (50 mM MOPSO, pH 7.0, 100 mM NaCl, 4 mM MgCl₂, 0.1% BSA) gebruikt, bevattende 7,5 ng His-getagd N-terminaal getrunceerd p110α of p110β eiwit, of 25 ng gezuiverd menselijk p110γ eiwit. De reactie wordt gestart door toevoeging van 5 µL van een 40-µM ATP-oplossing bevattende 20 µCi/mL [^{33>/sup>P]-ATP. Na 2 uur incubatie bij kamertemperatuur wordt de reactie beëindigd door toevoeging van 5 µL van een 25-mM EDTA-oplossing. De platen worden gewassen en Ultima Gold™ scintillatiecocktail (25 µL) wordt vervolgens toegevoegd. De radioactiviteit die is opgenomen in het geïmmobiliseerde PI-substraat wordt bepaald met een BetaPlate Liquid Scintillation Counter.}

• Cellijnen

  A series of cancer cell lines

• Concentraties

  ~5 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cell proliferation over a 72-hour period is determined using the CellTiter-Glo® luminescent cell viability kit. Briefly, cells are plated in separate microtiter plates. Following an overnight incubation at 37ºC, luminescence values in the t=0 hour plates are determined. Test compounds diluted in growth medium are added to the t=72 hour plates, and the cells are then incubated for 72 hours at 37ºC. Luminescence values are determined with a Wallac 1420 Victor2™ 1420 multilabel HTS counter after a 10-minute reaction with CellTiter-Glo® solution. The percentage inhibition of cell growth is calculated by subtracting the luminescence values in the t=0 hour plates from the corresponding values in the t=72 hour plates. Differences in values between drug-treated cells and controls are used to determine the percentage inhibition of cell growth.

• Dierlijke modellen

  Rats bearing KPL4 or HCT116 xenografts

• Doseringen

  6 mg/kg

• Toediening

  i.v.