Bardoxolone Methyl (RTA 402)

Bardoxolone Methyl vertoont krachtige remmende activiteiten tegen de productie van stikstofmonoxide geïnduceerd door interferon-Ƴ in muismacrofagen met een IC50 van 0,1 nM. [1] Deze verbinding vermindert de levensvatbaarheid van leukemische HL-60-, KG-1- en NB4-cellen met een IC50 van respectievelijk 0,4, 0,4 en 0,27 μM. Het induceert het pro-apoptotische Bax-eiwit, remt de activering van ERK1/2 en blokkeert Bcl-2-fosforylering, wat bijdraagt aan de inductie van apoptosis. [2] Deze chemische stof remt potent zowel constitutief als induceerbaar NF-kappaB geactiveerd door TNF, interleukine (IL)-1beta, forbolester, okadaïnezuur, waterstofperoxide, lipopolysaccharide en sigarettenrook. [3]

Bardoxolone Methyl (60 mg/kg) vermindert het aantal, de grootte en de ernst van longtumoren in vivo. [4] Deze verbinding vermindert significant de in vivo inflammatoire cytokinerespons na LPS-uitdaging, induceert HO-1-eiwitexpressie in de milt en beschermt muizen tegen een dodelijke dosis LPS. [5]

• IKK-test

  Om het effect van CDDO-Me op TNF-geïnduceerde IKK-activering te bepalen, wordt IKK geanalyseerd. Kortom, het IKK-complex uit hele-cel-extracten werd geprecipiteerd met een antilichaam tegen IKKα en IKKβ en vervolgens behandeld met proteïne A/G-Sepharose-korrels. Na 2 uur worden de korrels gewassen met lysisbuffer en vervolgens opnieuw gesuspendeerd in een kinase-assaymengsel dat 50 mmol/L HEPES (pH 7.4), 20 mmol/L MgCl₂, 2 mmol/L DTT, 20 μCi [γ-³²P]ATP, 10 μmol/L ongelabeld ATP en 2 μg substraat glutathion S-transferase-IκBα (aminozuren 1-54) bevat. Na incubatie bij 30°C gedurende 30 minuten wordt de reactie gestopt door 5 minuten te koken met SDS-monsterbuffer. Ten slotte wordt het eiwit opgelost op 10% SDS-PAGE, wordt de gel gedroogd en worden de radioactieve banden gevisualiseerd met een Storm820. Om de totale hoeveelheden IKK-α en IKK-β in elk monster te bepalen, worden 50 μg hele-cel-eiwitten opgelost op 7,5% SDS-PAGE, elektrotransfer naar een nitrocellulosemembraan en vervolgens geblot met ofwel anti-IKK-α of anti-IKK-β antilichaam.

• Cellijnen

  HL-60, KG-1, and NB4 cells

• Concentraties

  ~5 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Leukemic cell lines are cultured at a density of 3.0 × 10⁵ cells/mL, and AML mononuclear cells are cultured at 5 × 10⁵ cells/mL in the presence or absence of indicated concentrations of this compound. Appropriate amounts of DMSO (final concentration less than 0.05%) are included as control. For cytotoxicity studies, 1 μM ara-C is added to the cultures. After 24 to 72 hours, viable cells are counted with the trypan blue dye exclusion method using a hematocytometer.

• Dierlijke modellen

  Female A/J mice are injected i.p. with vinyl carbamate.

• Doseringen

  ~60 mg/kg

• Toediening

  Oral gavage