Degrasyn (WP1130)

Naast het induceren van een snelle down-regulatie van Bcr/Abl zonder Bcr of c-Abl te beïnvloeden, reguleert Degrasyn (WP1130) ook de stabiliteit van Jak2 en c-Myc zonder andere kinases (HER1, HER2, c-Kit, FAK, ERK1, ERK2, Akt, Btk, Src en Src-gerelateerde kinases) of transcriptiefactoren (wild-type p53, STAT1, STAT3, STAT5, c-Jun, NF-κB, en Max) te beïnvloeden. In tegenstelling tot adaphostin, induceert deze verbinding down-regulatie van Bcr/Abl binnen 60 minuten. Het is effectiever in het induceren van apoptose van myeloïde en lymfoïde tumorcellen met een IC50 van ~0.5-2.5 μM vergeleken met normale CD34⁺ hematopoëtische voorlopercellen, dermale fibroblasten, of endotheelcellen met een IC50 van ~5-10 μM. Deze chemische stof (5 μM) reguleert specifiek en snel zowel wild-type als T315I mutant Bcr/Abl-eiwit naar beneden zonder de bcr/abl-genexpressie te beïnvloeden of de proteasomale afbraakroute in chronische myeloïde leukemie (CML) cellen te activeren, gepaard gaande met inductie van apoptose. Het is effectiever in het verminderen van de kolonie vorming van leukemische cellen vergeleken met normale voorlopercellen, en effectief tegen primaire leukemische cellen met de T315I mutatie. [1] Deze verbinding induceert snelle proteasoom-afhankelijke afbraak van c-Myc-eiwit in MM-1 multipel myeloom en andere tumorcel lijnen, gecorreleerd met tumorremming. [2] In tegenstelling tot AG490 werkt het als een deels selectieve deubiquitinase (DUB) remmer om een snelle en duidelijke accumulatie van gepolyubiquitineerde (K48/K63-gekoppelde) eiwitten in juxtanucleaire aggresomen te induceren zonder de proteasoomactiviteit te beïnvloeden. Deze chemische stof (5 μM) remt direct de DUB-activiteit van USP9x, USP5, USP14, UCH-L1 en UCH37, maar niet UCH-L3, wat resulteert in downregulatie van anti-apoptotische en upregulatie van pro-apoptotische eiwitten, zoals MCL-1 en p53. [3]

Toediening van WP1130 remt de groei van K562 tumoren evenals zowel wild-type Bcr/Abl als T315I mutant Bcr/Abl-expresserende BaF/3 cellen getransplanteerd in naakte muizen. [1] Consistent met de down-regulatie van c-Myc, vertoont deze verbinding een krachtige remmende activiteit tegen A375 melanoomtumoren die zijn gevestigd in naakte muizen. [2]

• Cellijnen

  BV173, BV173R, K562, and BaF/3

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cells are treated with increasing concentrations of WP1130 (0.08-10 μM) in 96-well plates. Plates are incubated at 37 °C for 72 hours, after which 20 μL of MTT reagent is added, and the plates are incubated at 37 °C for another 2 hours. Cells are lysed with 100 μL lysis buffer (20% sodium dodecyl sulfate [SDS] in 50% N, N-dimethylformamide adjusted to pH 4.7 with 80% acetic acid and 1 M hydrochloric acid; final concentration of acetic acid is 2.5% and hydrochloric acid is 2.5%) and incubated for 6 hours. The optical density of each sample at 570 nm is determined with a SPECTRA MAX M2 plate reader.

• Dierlijke modellen

  Swiss Nu/Nu mice transplanted with K562 tumor cells, BaF/3wt cells, or BaF/3/T315I cells

• Doseringen

  ~40 mg/kg every other day

• Toediening

  Injected intraperitoneally