RAF265 (CHIR-265)

Catalogusnr.S2161 Batch:S216103

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C24H16F6N6O
Molecuulgewicht 518.41 CAS-nr. 927880-90-8
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 100 mg/mL (192.89 mM)
Water Insoluble
In Vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving RAF265 (CHIR-265) is een potente selectieve remmer van C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E met een IC50 van 3-60 nM, en vertoont een potente remming van VEGFR2 fosforylering met een EC50 van 30 nM in celvrije assays. Deze verbinding induceert celcyclusarrest en apoptose. Fase 2.
Doelen
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
In vitro RAF265 (CHIR-265) remt C-Raf, wild type B-Raf en mutant (V600E) B-Raf. Deze verbinding blokkeert effectief de fosforylering van Raf's stroomafwaartse substraten MEK en ERK in cellen en doodt ook melanoom- en colorectale kankercellijnen die B-Raf mutaties bevatten, onafhankelijk van de PTEN mutatiestatus. Raf kinase remming door dit middel in mutante B-Raf melanoomcellijnen veroorzaakt celcyclusarrest en induceert apoptosis, wat het effect van Raf RNAi in deze cellen nabootst. Het remt ook potent de fosforylering van VEGFR2 en proliferatie van VEGF-gestimuleerde hMVEC. In HT29 en MDAMB231 cellen vertoont deze chemische stof remmende activiteit met IC20 van 1 tot 3 μM en IC50 van 5 tot 10 μM, respectievelijk. Terwijl het leidt tot een significante afname van de clonogene overleving in alle geteste cellijnen, wat betekent dat deze verbinding een dominant effect induceert op de clonogene overleving. Toevoeging van dit middel aan RAD001 in HCT116 cellen zou kunnen leiden tot een matig verminderde AKT, S6 proteïne en 4EBP1 fosforylering. Het vermindert het proteïneniveau van Bcl-2 aanzienlijk en is sterk remmend in CM- en NCI-H727 cellen, terwijl het geen effect heeft op de TRAIL gevoeligheid van BON1 en GOT1 cellen. Proteïne kinase D3 (PRKD3) dat bij knockdown de celdoding door deze verbinding in A2058 melanoomcellen zou kunnen verbeteren, wat de reactivering van MAPK signalering voorkomt, PARP splitsing induceert, caspase activiteit verhoogt, celcyclusprogressie onderbreekt en kolonieformatie remt.
In Vivo RAF265 (CHIR-265) vertoont 71% tot 72% TVI% (tumorvolume-inhibitiepercentage) in HCT116 xenografts bij 12 mg/kg. Terwijl de combinatie van deze verbinding en RAD001 een verhoogde antitumoractiviteit vertoont met verhoogde T10 (tijd om een relatief tumorvolume van 10 keer het initiële tumorvolume te bereiken) en tumorgerelateerde groeivertraging. De combinatie van RAD001 en deze chemische stof verbetert ook significant de activering van caspase-3 in HCT116 en MDAMB231, maar niet in A549 xenografts. Deze verbinding remt de FDG (2-deoxy-2-[18F]fluoro-d-glucose) accumulatie en vermindert de tumorvolumes in A375M xenografts door orale toediening van 100 mg/kg.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • Assay Protocol

    Raf en Mek worden gecombineerd bij 2 × eindconcentraties in assaybuffer (50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCl2. 0.1 mM EDTA en 1 mM DTT) en 15 μL per putje gedispenseerd in polypropyleen assayplaten. Achtergrondniveaus worden bepaald in putjes die Mek en DMSO bevatten zonder Raf. Aan de Raf/Mek bevattende putjes wordt 3 μL van 10 × van deze verbinding, verdund in 100% DMSO, toegevoegd. De Raf kinase activiteitsreactie wordt gestart door de toevoeging van 12 μL per putje van 2.5 × 33P-ATP, verdund in assaybuffer. Na 45-60 minuten worden de reacties gestopt met de toevoeging van 70 μL stopreagens (30 mM EDTA). Filtratieplaten worden 5 minuten voorbevochtigd met 70% ethanol en vervolgens gespoeld door filtratie met wasbuffer. Monsters (90 μL) uit de reactieputjes worden vervolgens overgebracht naar de filtratieplaten. De filtratieplaten worden 6 × gewassen met wasbuffer met behulp van Millipore filtratieapparatuur. De platen worden gedroogd en 100 μL per putje scintillatievloeistof wordt toegevoegd. De CPM wordt vervolgens bepaald met behulp van een Wallac Microbeta 1450 lezer.
Celassay:[2]
  • Cellijnen

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • Concentraties

    0.1 - 10 μM

  • Incubatietijd

    48 hours

  • Methode

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
Dierstudie:[2]
  • Dierlijke modellen

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • Doseringen

    12 mg/kg

  • Toediening

    Orally administered daily

Referenties

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Klantproductvalidatie

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

Gegevens van [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

Gegevens van [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

Gegevens van [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

Gegevens van [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) Is geciteerd door 24 Publicaties

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.