NVP-ADW742

NVP-ADW742 vertoont een 6-voudig grotere selectiviteit voor IGF-1R versus InsR met IC50 van 2,8 μM; minimale remmende activiteit tegen c-Kit, HER1, PDGFR, VEGFR2, of Bcr-Abl p210 met IC50 groter dan 5 μM. Deze verbinding remt de serum-gestimuleerde celproliferatie significant in een verscheidenheid aan tumorcellijnen op een dosisafhankelijke manier, met IC50-waarden van 0,1-0,5 μM voor de multiple myeloom (MM) cellijnen, en de antitumorale effecten op MM-cellen kunnen niet worden overwonnen door de co-cultuur met BMSC's. Het heft ook de responsiviteit van tumorcellen op IL-6 op in aanwezigheid van serum. Bovendien is deze chemische stof actief tegen MM-cellijnen met resistentie tegen conventionele (cytotoxische chemotherapie) of experimentele (CC-5013, TRAIL/Apo2L, PS-341) antikankermiddelen, evenals primaire tumorcellen van MM-patiënten met multiresistente ziekte. Deze verbinding vermindert de productie van VEGF door tumorcellen en beenmergstromale cellen, en onderdrukt de IGF-1-geïnduceerde secretie van VEGF door verschillende tumortypes zoals schildklierkankercellen of MM-cellen. IGF-1R-remming door deze verbinding (0,75 μM) maakt MM-cellen of prostaatkankercellen gevoelig voor andere antikankermiddelen zoals doxorubicine, TRAIL/Apo2L, of PS-341. [1]

Toediening van NVP-ADW742 in een dosis van 10 mg/kg tweemaal daags remt de tumorgroei significant, verlengt de overleving en versterkt het antitumorale effect van cytotoxische chemotherapie in het muismodel van diffuus MM. [1]

• Cellulaire kinase-activiteitsbepaling

  De IC50-waarde voor het effect van NVP-ADW742 op de autofosforylering van IGF-1R wordt op cellulair niveau bepaald in aanwezigheid van toenemende concentraties van deze verbinding, met behulp van 96-well “Capture ELISAs”-assays. Kortom, NWT-21-cellen worden gezaaid in 96-well weefselkweekplaten in compleet groeimedium en gekweekt tot 70-80% confluentie, en worden vervolgens 24 uur uitgehongerd in 0,5% FCS-medium. Vervolgens worden de cellen 90 minuten geïncubeerd in aanwezigheid van deze remmer, gevolgd door stimulatie met IGF-I (10 ng/mL) gedurende 10 minuten bij 37 °C. Daarna worden de cellen tweemaal gewassen met ijskoud PBS en gelyseerd bij 4 °C met 50 μL/well RIPA-buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7,2, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 6 mM EGTA, 1% NP-40, 20 mM NaF, 1 mM benzamidine, 15 mM natriumpyrofosfaat, 1 mM PMSF en 0,5 mM Na₃VO₄). De lysaten van elk experiment worden vervolgens overgebracht naar zwarte ELISA-platen die vooraf zijn gecoat met capture-antilichamen specifiek voor IGF-1R. Na binding door de antilichamen worden de lysaten gemengd met 40 μL van een alkalische fosfatase (AP) gelabeld anti-fosfotyrosine Ab (PY20(AP) verdund tot 0,2 μg/mL in RIPA-buffer, en een nacht geïncubeerd bij 4 °C. Na wassen (PBST) en incubatie gedurende 45 minuten bij RT met het luminescerende AP-substraat CDPStar RTU met Emerald II (90 μL/well), wordt de luminescentie gemeten met behulp van een Packard Top Count Scintillation Counter.

• Cellijnen

  MM-1S, MM-1R, RPMI-8226/S, OPM-1, OCI-My5, SKMM2, KMS-12-BM, XG-1, L363, S6B45 cells and et al.

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 10 μM

• Incubatietijd

  48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of NVP-ADW742 for 48 hours in the presence or absence of serum. Cell survival is examined using MTT assay.

• Dierlijke modellen

  Male SCID/NOD mice injected i.v. with MM-1S-Luc⁺ human MM cells

• Doseringen

  10 mg/kg twice daily

• Toediening

  Injection i.p. or oral gavage