NVP-ADW742

NVP-ADW742 exhibits a 6-fold greater selectivity for IGF-1R versus InsR with IC50 of 2.8 μM; minimal inhibitory activity against c-Kit, HER1, PDGFR, VEGFR2, or Bcr-Abl p210 with IC50 greater than 5 μM. This compound significantly inhibits the serum-stimulated cell proliferation in a variety of tumor cell lines in dose-dependent manner, with IC50 values of 0.1-0.5 μM for the multiple myeloma (MM) cell lines, and the antitumor effects on MM cells can not be overcome by the co-culture with BMSCs. It also abrogates the responsiveness of tumor cells to IL-6 in the presence of serum. In addition, this chemical is active against MM cell lines with resistance to conventional (cytotoxic chemotherapy) or investigational (CC-5013, TRAIL/Apo2L, PS-341) anticancer agents, as well as primary tumor cells from MM patients with multi-drug-resistant disease. This compound decreases the production of VEGF by tumor cells and bone marrow stromal cells, and suppresses the IGF-1-induced secretion of VEGF by various tumor types such as thyroid cancer cells or MM cells. IGF-1R inhibition by this compound (0.75 μM) sensitizes MM cells or prostate cancer cells to other anticancer agents such as doxorubicin, TRAIL/Apo2L, or PS-341. [1]

Administration of NVP-ADW742 at 10 mg/kg twice daily significantly inhibits tumor growth, prolongs survival, and enhances the antitumor effect of cytotoxic chemotherapy in the mice model of diffuse MM. [1]

• Cellulaire kinase-activiteitsbepaling

  De IC50-waarde voor het effect van NVP-ADW742 op de autofosforylering van IGF-1R wordt op cellulair niveau bepaald in aanwezigheid van toenemende concentraties van deze verbinding, met behulp van 96-well “Capture ELISAs”-assays. Kortom, NWT-21-cellen worden gezaaid in 96-well weefselkweekplaten in compleet groeimedium en gekweekt tot 70-80% confluentie, en worden vervolgens 24 uur uitgehongerd in 0,5% FCS-medium. Vervolgens worden de cellen 90 minuten geïncubeerd in aanwezigheid van deze remmer, gevolgd door stimulatie met IGF-I (10 ng/mL) gedurende 10 minuten bij 37 °C. Daarna worden de cellen tweemaal gewassen met ijskoud PBS en gelyseerd bij 4 °C met 50 μL/well RIPA-buffer (50 mM Tris-HCl, pH 7,2, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 6 mM EGTA, 1% NP-40, 20 mM NaF, 1 mM benzamidine, 15 mM natriumpyrofosfaat, 1 mM PMSF en 0,5 mM Na₃VO₄). De lysaten van elk experiment worden vervolgens overgebracht naar zwarte ELISA-platen die vooraf zijn gecoat met capture-antilichamen specifiek voor IGF-1R. Na binding door de antilichamen worden de lysaten gemengd met 40 μL van een alkalische fosfatase (AP) gelabeld anti-fosfotyrosine Ab (PY20(AP) verdund tot 0,2 μg/mL in RIPA-buffer, en een nacht geïncubeerd bij 4 °C. Na wassen (PBST) en incubatie gedurende 45 minuten bij RT met het luminescerende AP-substraat CDPStar RTU met Emerald II (90 μL/well), wordt de luminescentie gemeten met behulp van een Packard Top Count Scintillation Counter.

• Cellijnen

  MM-1S, MM-1R, RPMI-8226/S, OPM-1, OCI-My5, SKMM2, KMS-12-BM, XG-1, L363, S6B45 cells and et al.

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 10 μM

• Incubatietijd

  48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of NVP-ADW742 for 48 hours in the presence or absence of serum. Cell survival is examined using MTT assay.

• Dierlijke modellen

  Male SCID/NOD mice injected i.v. with MM-1S-Luc⁺ human MM cells

• Doseringen

  10 mg/kg twice daily

• Toediening

  Injection i.p. or oral gavage