HA14-1

HA14-1 is een klein molecuul en niet-peptidische ligand van een Bcl-2 oppervlaktezak met IC50 van ongeveer 9 µM. Deze verbinding induceert de apoptose van HL-60-cellen op een dosisafhankelijke manier via caspase-activering. [1] Het vertoont cytotoxische effecten op HF1A3, HF4.9 en HF28RA folliculaire lymfoom B-cellijnen met LC50 van respectievelijk 4,5 µM, 12,6 µM en 8,1 µM. Deze chemische stof induceert apoptose van HF1A3-, HF4.9- en HF28RA-cellen via caspase en ROS. [2]

HA14-1 (400 nM) behandeling had geen significant effect op de groei van glioblastoomtumoren bij immuundeficiënte muizen. Maar deze verbinding verhoogt het effect van het DNA-beschadigende middel op de groei van glioblastoom in vivo. [3]

• Affiniteitsbepaling

  De bindingsaffiniteit van organische verbindingen aan het Bcl-2-eiwit in vitro wordt bepaald door een competitieve bindingsassay gebaseerd op fluorescentiepolarisatie. Voor deze assay wordt 5-carboxyfluoreceïne gekoppeld aan de N-terminus van een peptide, GQVGRQLAIIGDDINR, afgeleid van het BH3-domein van Bak (Flu-BakBH3), waarvan is aangetoond dat het met hoge affiniteit bindt aan de oppervlaktezak van het Bcl-xL-eiwit. Volgens onze moleculaire modelleringsstudies en bindingsmeting met behulp van fluorescentiepolarisatie, bindt het Flu-BakBH3-peptide met een vergelijkbare affiniteit aan de oppervlaktezak van Bcl-2. Bcl-2 gebruikt in deze assay is een recombinant GST-gefuseerd oplosbaar eiwit. Flu-BakBH3 en Bcl-2-eiwit worden gemengd in aanwezigheid of afwezigheid van organische verbindingen onder standaard bufferomstandigheden en worden gedurende 30 min geïncubeerd. De binding van Flu-BakBH3 aan Bcl-2-eiwit wordt gemeten op een LS-50 luminescentiespectrometer uitgerust met polarisatoren met behulp van een kwartscel met dubbele padlengte (500 μl). De fluorofoor wordt geëxciteerd met verticaal gepolariseerd licht bij 480 nm (excitatiesspleetbreedte 15 nm), en de polarisatiewaarde van het uitgezonden licht wordt waargenomen via verticale en horizontale polarisatoren bij 530 nm (emissiespleetbreedte 15 nm). De bindingsaffiniteit van elke verbinding voor Bcl-2-eiwit wordt beoordeeld door het vermogen van verschillende concentraties van de verbinding te bepalen om de binding van Flu-BakBH3 aan Bcl-2 te remmen.

• Cellijnen

  HF1A3, HF4.9 and HF28RA cells

• Concentraties

  ~25 μM

• Incubatietijd

  20 h

• Methode

  The cytotoxic effects of HA14-1 against different FL cell lines are determined by the MTT assay. Briefly, the cells (5000/well) are incubated in triplicate in 96-well plate in the presence or absence of this compound for 20 h at 37 °C. Thereafter, the MTT solution is added to each well. After 4 h incubation at 37 °C, the optical density (OD) is measured by means of 96-well plate reader, with the extraction buffer as a blank. The following formula is used: percentage cell viability = (OD of the experiment samples/OD of the control) × 100. Sigmoidal dose-response curves are fitted to the mean cell viability plotted against log this chemical dose and lethal concentration 50% (LC50) values are calculated from the resulting curves using Prism 4.0 softw

• Dierlijke modellen

  Female Swiss nude mice bearing BeGBM xenografts.

• Doseringen

  400 nM

• Toediening

  Inject at the site of cell injection.