GSK461364

GSK461364 remt de proliferatie van kankercellijnen van meerdere oorsprongen met minimale toxiciteit in niet-delende menselijke cellen. [1] RNA-silencing van WT p53 verhoogt de antiproliferatieve activiteit van deze verbinding. Aangezien veel kankertherapieën effectiever blijken te zijn bij p53 WT-patiënten, zou de hogere gevoeligheid van p53-deficiënte tumoren voor deze chemische stof mogelijk een kans kunnen bieden om tumoren te behandelen die resistent zijn tegen andere chemotherapieën, evenals eerstelijnsbehandeling voor deze genotypen. Deze verbinding is een thiofeenamide dat gezuiverd Plk1-enzym in vitro remt met een K_i van 2 nM en een >100-voudige selectiviteit heeft voor Plk1 vergeleken met Plk2 en Plk3. Het is een krachtige remmer van celproliferatie, die een 50% groei-inhibitie (GI50) veroorzaakt van minder dan 100 nM in de meeste geteste cellijnen met beperkte toxiciteit tegen menselijke niet-prolifererende cellen. De remming van de Cell Cycle-progressie is concentratieafhankelijk met een initiële vertraging in de G2-fase bij hoge concentraties van dit middel en arrestatie in de M-fase bij lagere concentraties. Momenteel bevindt het zich in een dosis-escalatie first-time-in-human studie. Cellijnen met mutaties in het TP53-gen bleken gevoeliger voor deze verbinding, en het remmen van de p53-respons door RNA-silencing verleent een verhoogde gevoeligheid in sommige p53 wild-type (WT) cellen. Bovendien hebben deze gevoeliger cellijnen ook verhoogde niveaus van chromosoominstabiliteit, een kenmerk dat geassocieerd wordt met TP53-mutaties. [2] In preklinische tests vertoont deze chemische stof antiproliferatieve activiteit tegen meerdere (>120) tumorcellijnen en remt het krachtig de proliferatie van meer dan 83% en 91% van deze cellijnen, met IC50-waarden lager dan 50 en 100 nM, respectievelijk. [3]

Celkweekgroeiremming door GSK461364 kan cytostatisch of cytotoxisch zijn, maar leidt tot tumorregressie in xenograft-tumormodellen onder de juiste doseringsschema's. Deze verbinding vertoont duidelijke antitumoractiviteit in menselijke tumorxenograftmodellen. [1] Het vertoont een dosisafhankelijke mitotische arrestatie in muizenxenografts, wat correleert met effecten op tumorgroei. [2] Intraperitoneale toediening van deze chemische stof veroorzaakt regressie of tumorgroeivertraging in verschillende xenograftmodellen, waaronder Colo205-xenografts. Onderdrukking van Plk1 in vivo door gebruik van dit middel resulteert in mitotische arrestatie met afwijkende mitotische figuren bestaande uit monopolaire of ineengestorte mitotische spindels. [3]

• Enzymassays

  Kinase-reacties worden uitgevoerd in een finaal assayvolume van 10 μL met behulp van de Z-Lyte Assay kit (Ser/Thr peptide 16). Kortom, reacties bevatten 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 1 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.01 mg/mL caseïne, 200 μM ATP, 200 μM Polo Box peptide (NH₂-MAGPMQS[pT]PLNGAKK-OH), en 6 nM recombinant Plk1 (H6-tev-PLK 1-603). Plk1 wordt 60 minuten voorgeïncubeerd met 0 tot 1 μM GSK461364. Reacties worden vervolgens geïnitieerd door de toevoeging van 2 μM peptide. Na 15 minuten bij 23 °C worden reacties geblust en verwerkt volgens het Z′-Lyte-protocol en afgelezen op een EnVision-plaatlezer. Ruwe fluorescentiewaarden worden omgezet in de concentratie van het gevormde product met behulp van substraat- en productstandaarden. Omdat de potentie van remming voor deze verbinding varieert als functie van de ATP-concentratie op een manier die consistent is met een ATP-competitieve remmingsmodus, wordt een bovengrens voor de K_i voor deze chemische stof bepaald.

• Cellijnen

  Prostate(LNCap,PC3), Cervix(HeLa), Pancreas(ASPC1), Sarcoma(Saos-2)Ovary(OVCAR8), Stomach(NCI-N87), Melanoma(SKMEL3,A431, MALME3M), Colon(Colo205,SW620,HCT116), Breast(SKBR3,MDA-MB-453,MCF7), Lung(NCI-H82,MV522,NCI-H522), etc.

• Concentraties

  10 nM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cancer cell lines are seeded into 384-well microtiter plates. After seeding, the cells are incubated at 37 °C in 5% CO₂ for 24 hours. GSK461364 is added to each cell line at 10 nM with a nontreated control. A zero-time (T = 0) value is read for each cell line. After 72 hours, the medium containing this compound or DMSO control is aspirated from all of the remaining cells and the cell nuclei are stained with 4′,6-diamidino-2-phenylindole and the fluorescent intensity measured using an InCell1000 High Content Analyzer. The percent intensity of the 4′,6-diamidino-2-phenylindole stain at 72 hours, relative to intensity at time zero, is calculated for each concentration of this chemical in each of the triplicate wells.

• Dierlijke modellen

  Nude mice bearing Colo205 (colorectal) xenograft tumors

• Doseringen

  25, 50, and 100 mg/kg

• Toediening

  Administered via i.p.(every 2 days or every 4 days)