Enzastaurin

Toepassing van Enzastaurin resulteert in een duidelijke dosisafhankelijke groeiremming in alle onderzochte MM-cellijnen, inclusief MM.1S, MM.1R, RPMI 8226 (RPMI), RPMI-Dox40 (Dox40), NCI-H929, KMS-11, OPM-2 en U266, met een IC50 van 0,6-1,6 V5M. Deze verbinding heeft een directe invloed op menselijke tumorcellen, induceert apoptose en onderdrukt proliferatie in gekweekte tumorcellen. Het onderdrukt ook de fosforylering van GSK3 V2^ser9, ribosomaal eiwit S6S240/244 en AKTThr308, terwijl het geen direct effect heeft op VEGFR-fosforylering. [1] Deze chemische stof verhoogt de apoptose in maligne lymfocyten van CTCL. In combinatie met GSK3-remmers demonstreerde het een verbetering van de cytotoxiciteitsniveaus. Behandeling met een combinatie van deze verbinding en de GSK3-remmer AR-A014418 leidde tot verhoogde niveaus van V2-catenine totaal eiwit en V2-catenine-gemedieerde transcriptie. Blokkeren van V2-catenine-gemedieerde transcriptie of small hairpin RNA (shRNA) knockdown van V2-catenine induceerde dezelfde cytotoxische effecten als die van het plus AR-A014418. Bovendien verminderde behandeling hiermee en AR-A014418 de mRNA-niveaus en oppervlakte-expressie van CD44. [2]

Behandeling van xenografts met Enzastaurin en straling produceerde grotere reducties in de dichtheid van microvaten dan elke behandeling afzonderlijk. De afname in microvatdichtheid correspondeerde met vertraagde tumorgroei. [3]

• Kinase-remmingstesten

  De remming van PKC V2II, PKC Va, PKC Ve of PKC Vg activiteit door enzastaurin wordt bepaald met behulp van een filterplaat assay-formaat dat ³³P-incorporatie in myeline basische eiwitsubstraat meet. Reacties worden uitgevoerd in reactievolumes van 100 V5L in 96-well polystyreenplaten met de volgende uiteindelijke omstandigheden: 90 mM HEPES (pH 7.5), 0.001% Triton X-100, 4% DMSO, 5 mM MgCl₂, 100 V5M CaCl₂, 0.1 mg/mL fosfatidylserine, 5 V5g/mL diacetylglycerol, 30 V5M ATP, 0.005 V5Ci/ V5L ³³ATP, 0.25 mg/mL myeline basisch eiwit, seri Vble verdunningen van deze verbinding (1-2.000 nM) en recombinante menselijke PKC V2II, PKC Va, PKC Ve of PKC Vg enzymen (respectievelijk 390, 169, 719 of 128 pM). Reacties worden gestart door toevoeging van het enzym en ge Vcncubeerd bij kamertemperatuur gedurende 60 minuten. Ze worden vervolgens geblust met 10% H₃PO₄, overgebracht naar multiscreen anionische fosfocellulose 96-well filterplaten, gedurende 30 tot 90 minuten ge Vcncubeerd, gefilterd en gewassen met 4 volumes van 0.5% H₃PO₄ op een vacu V8mverdeelstuk. Scintillatiecocktail wordt toegevoegd en platen worden gelezen op een Microbeta scintillatieteller. IC50-waarden worden bepaald door een drie-variabele logistische vergelijking aan de 10-punts dosis-responsgegevens te fitten met behulp van ActivityBase 4.0.

• Cellijnen

  HCT116 and U87MG cells

• Concentraties

  0.3-4 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Induction of apoptosis by enzastaurin is measured by nucleosomal fragmentation and terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated nick-end labeling (TUNEL) and staining in HCT116 and U87MG cell lines. Briefly, 5 × 10³ cells are plated per well in 96-well plates (1% FBS-supplemented media conditions), incubated with or without this compound for 48 to 72 hours. The absorbance values are normalized to those from control-treated cells to derive a nucleosomal enrichment factor at all concentrations as per the manufacturer's protocol. The concentrations studied ranges from 0.1 to 10 μM. In situ TUNEL staining is assayed with the In situ Cell Death Detection. Cells (7.5 ?10⁴) are plated per well in 6-well plates and incubated 72 hours in 1% FBS-supplemented media ?this chemical. labeled DNA strand breaks are detected with the BD epics flow cytometer. Ten thousand, single-cell, FITC-staining events are collected for each test.

• Dierlijke modellen

  Athymic nude mice; Mouse besring human MM tumors

• Doseringen

  75 mg/kg twice daily; 30 mg/kg twice daily

• Toediening

  By gavage