CUDC-101

Specifiek voor klasse I en klasse II HDACs, remt CUDC-101 geen klasse III Sir-type HDACs. Deze verbinding vertoont zwakke activiteit tegen andere proteïnekinasen, waaronder KDR/VEGFR2, Lyn, Lck, Abl-1, FGFR-2, Flt-3 en Ret met een IC50 van respectievelijk 0,85 µM, 0,84 µM, 5,91 µM, 2,89 µM, 3,43 µM, 1,5 µM en 3,2 µM. Het vertoont een brede antiproliferatieve activiteit in vele menselijke kankerceltypen met een IC50 van 0,04-0,80 µM, wat in de meeste gevallen een hogere potentie en combinaties van vorinostat vertoont. Deze chemische stof remt krachtig kankercellijnen. [1] Het remt de resistente EGFR-mutant T790M, hoewel de effecten onvolledig zijn met een Amax van ~60% van de piek-enzymactiviteit na remming. Deze verbinding behandeling verhoogt de acetylering van histon H3 en H4, evenals de acetylering van niet-histon substraten van HDAC zoals p53 en α-tubuline, op een dosisafhankelijke manier in verschillende kankercellijnen. Het onderdrukt ook HER3-expressie, Met-amplificatie en AKT-reactivering in tumorcellen. [2]

Toediening van CUDC-101 met 120 mg/kg/dag induceert tumorregressie in het Hep-G2 leverkankermodel, wat effectiever is bij de maximaal getolereerde dosis (25 mg/kg/dag) en vorinostat bij een equimolaire concentratiedosis (72 mg/kg/dag). Deze verbinding remt de groei van gevoelige H358 NSCLC xenografts op een dosisafhankelijke manier. Het toont ook krachtige remming van tumorgroei in het -resistente A549 NSCLC xenograftmodel. Deze chemische stof produceert significante tumorregressie in het -resistente, HER2-negatieve, EGFR-overexpresserende MDA-MB-468 borstkankermodel en het EGFR-overexpresserende CAL-27 hoofd-hals plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) model. Bovendien remt het tumorgroei in de K-ras mutant HCT116 colorectale en EGFR/HER2 (neu)-expresserende HPAC alvleesklierkankermodellen. [1]

• HDAC, EGFR en HER2 remmingsassays

  De activiteiten van klasse I en II HDACs worden beoordeeld met behulp van het Biomol Color de Lys-systeem. Kortom, nucleaire extracten van HeLa-cellen worden gebruikt als bron van HDACs. Verschillende concentraties CUDC-101 worden toegevoegd aan nucleaire extracten van HeLa-cellen in aanwezigheid van een colorimetrisch kunstmatig substraat. Ontwikkelaar wordt toegevoegd aan het einde van de assay en enzymactiviteit wordt gemeten in de Wallac Victor II 1420 microplaatlezer bij 405 nM. EGFR en HER2 kinaseactiviteit worden gemeten met behulp van HTScan EGF receptor en HER2 kinase assaykits. Kortom, het GST-EGFR-fusie-eiwit wordt geïncubeerd met synthetisch gebiotinyleerd peptidesubstraat en variërende concentraties van deze verbinding in aanwezigheid van 400 mM ATP. Gefosforyleerd substraat wordt vastgelegd met strapavidine-gecoate 96-well platen. Het niveau van fosforylering wordt gecontroleerd door anti-fosfo-tyrosine- en europium-gelabelde secundaire antilichamen. De versterkingsoplossing wordt toegevoegd aan het einde van de assay en enzymactiviteit wordt gemeten in de Wallac Victor II 1420 microplaatlezer bij 615 nM.

• Cellijnen

  HCC827, H358, H460, HepG2, Hep3B2, Sk-Hep-1, Capan1, BxPc3, MCF-7, MDA-MB-231, and Sk-Br-3

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cancer cell lines are plated at 5000 to 10000 cells per well in 96-well flatbottomed plates with varying concentrations of CUDC-101. The cells are incubated with this compound for 72 hours in the presence of 0.5% of fetal bovine serum. Growth inhibition is assessed by an adenosine triphosphate (ATP) content assay using the Perkin-Elmer ATPlite kit. Apoptosis is routinely assessed by measuring the activities of Caspase-3 and -7 using Apo-ONE Homogeneous Assay Kit.

• Dierlijke modellen

  Female athymic mice (nude nu/nu CD-1) inoculated with Hep-G2, H358, A549, MDA-MB468, HCT116, CAL-27, HepG2, or HPAC

• Doseringen

  ~120 mg/kg/day

• Toediening

  Administered via i.v.