Abiraterone Acetate

Abiraterone vertoont een goede complexatie met het heemijzer alleen in SM1. [1] Abiraterone blokkeert de synthese van androgenen door CYP17A1 te remmen. Abiraterone blokkeert ook 3β-hydroxysteroïde dehydrogenase (3βHSD), een enzym dat absoluut noodzakelijk is voor de synthese van biologisch actieve androgenen. Abiraterone remt de omzetting van DHEA naar Δ⁴-androstenedion. Abiraterone-remming van 3βHSD blokkeert de DHT-synthese en de Androgen Receptor-respons. Abiraterone remt de omzetting van Δ⁵-androstenediol naar testosteron. [2] Abiraterone remt C_17,20-lyase, met een IC50 van 5,8 nM, in ratten testis microsomen. Abiraterone remt de testosteronsecretie significant (−48%) en verhoogt op zijn beurt de LH-concentratie (192%). [3] Abiraterone remt in vitro proliferatie en AR-gereguleerde genexpressie van AR-positieve prostaatkankercellen, wat verklaard kan worden door AR-antagonisme naast remming van steroidogenese. [4]

Na intraperitoneale toediening in een knaagdiermodel bleek abiraterone een snelle deacetylation te ondergaan. Wanneer het werd toegediend als zijn acetaat pro-drug (CB 7630), onderdrukte het de circulerende testosteron tot ondetecteerbare niveaus en verminderde het de gewichten van androgeengevoelige organen aanzienlijk. Abiraterone wordt goed verdragen en de gemiddelde eliminatiehalfwaardetijd van abiraterone in deze studies was 27,6 uur (wat het gebruik van eenmaal daagse dosering ondersteunt)[5]. Preklinische studies met abiraterone toonden een vermindering van de androgeenproductie stroomafwaarts van CYP17 aan, wat resulteerde in een verminderd gewicht van de ventrale prostaat, testis en zaadblaasjes bij muizen[6].

• C_17,20-lyase activiteitsbepaling

  Microsomen worden verdund tot een uiteindelijke eiwitconcentratie van 50 μg/mL in het reactiemengsel dat 0,25 M sucrose, 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 10 mM G6P en 1,2 IE/mL G6PDH bevat. Na equilibratie bij 37 °C gedurende 10 minuten, wordt de reactie geïnitieerd door toevoeging van βNADP om een uiteindelijke concentratie van 0,6 mM te verkrijgen. Voordat 600 μL van het reactiemengsel in elke buis wordt verdeeld, worden testverbindingen onder een stroom stikstof drooggedampt en vervolgens gedurende 10 minuten bij 37 °C geïncubeerd. Na incubatie met Abiraterone wordt 500 μL van het reactiemengsel overgebracht naar buizen die 1 μM van het enzymsubstraat, 17OHP, bevatten. Na nog eens 10 minuten incubatie worden de buizen op ijs geplaatst en wordt de reactie gestopt door toevoeging van 0,1 ml NaOH 1N. De buizen worden diepgevroren en bewaard bij -20 °C totdat ze worden geanalyseerd op Δ4A-niveaus. Een Δ4A RIA wordt ontwikkeld en geautomatiseerd op een microplaatformaat in ons laboratorium met behulp van een specifieke antilichaam tegen Δ4A en instructies van Biogenesis. De scheiding van vrij en gebonden antigeen wordt bereikt met een dextraan-gecoate houtskoolsuspensie. Na centrifugatie worden aliquots van de heldere supernatant in duplo geteld in een vloeistofscintillatieteller. De Δ4A-concentraties van onbekende monsters worden bepaald uit de standaardcurve. De detectielimiet is 0,5 ng/mL en de intra- en inter-assay variatiecoëfficiënten zijn respectievelijk 10,7 en 17,6% bij een assaywaarde van 13 ng/mL. De snelheid van de enzymatische reactie wordt uitgedrukt als pmol Δ4A gevormd per 10 minuten en per mg eiwit. De waarde van de maximale activiteit zonder remmer (controle) wordt ingesteld op 100%. De IC50-waarden worden berekend met behulp van niet-lineaire analyse uit de grafiek van enzymactiviteit (%) tegen log van de remmerconcentratie.

• Cellijnen

  LNCaP and VCaP cells

• Concentraties

  0 μM -10 μM

• Incubatietijd

  24 hours and 96 hours

• Methode

  LNCaP and VCaP cells are seeded in 96-well plates and grown in CSS-supplemented phenol red-free or FBS-supplemented media for 7 days. Cells are treated with Abiraterone at 24 hours and 96 hours after plating and cell viability is determined on day 7 by adding CellTiter Glo and measuring luminescence.

• Dierlijke modellen

  Male NOD/SCID mice with LAPC4 cells

• Doseringen

  0.5 mmol/kg/d

• Toediening

  Administered via s.c.