740 Y-P (PDGFR 740Y-P)

Het PDGFR 740Y-P-peptide stimuleert een mitogene respons in spiercellen. Het vermogen van het 740Y-P-peptide om mitogenese te stimuleren is zeer specifiek en geen algemeen kenmerk van celpermeabele SH2-domeinbindende peptiden[2].

740Y-P is even effectief als een groeifactor (FGF2) bij het bevorderen van de overleving van neuronale cellen via de gevestigde PI 3-kinase-Akt-overlevingscascade. Stimulatie van de overleving van neuronale cellen door het PDGFR740Y-P-peptide is dosisafhankelijk en vereist geen insuline[1].

740 Y-P vermindert de ROS-niveaus in Aβ(25-32)-behandelde hippocampusweefsels en verhoogt de mate van AKT- en PI3K-fosforylatie in een ratmodel voor de ziekte van Alzheimer.

• Cellijnen

  NIH 3T3 cells

• Concentraties

  50 μg/ml

• Incubatietijd

  2 h

• Methode

  NIH 3T3 cells (2×10⁶) are incubated in suspension at 37°C in Ca2+ and Mn2+ free HBSS, 10% FCS containing either 50 μg/ml of 740Y-P peptide or an equal volume of PBS as a control. After 2h cells are centrifuged, washed and trypsinised to degrade non-internalised peptide. Cells are then resuspended in lysis buffer (50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 10% Glycerol, 2% NP40, 0.25% deoxycholate, 1 mM EDTA, 1 mM Vanadate, Protease inhibitors "complete" cocktail from Boehringer-Mannheim) for 1 h at 4°C. Lysates are clarified by centrifugation at 1.4×10⁴g for 5 min and the supernatants are incubated for 1h with streptavidin-agarose beads. Beads are subsequently washed three times in lysis buffer and finally boiled in SDS sample buffer and resolved by SDS-PAGE on a 12% gel, transferred to nitrocellulose and immunoblotted with the p85 monoclonal antibody.