3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride

3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) resulteert in een significante toename van de accumulatie van cellen in de G0/G1-fase (58,5%) met een gelijktijdige afname van het aantal cellen in de S-fase (35,2%) en G2/M-fasen (6,3%) van de celcyclus van menselijke acute myeloïde leukemie OCI-AML3-cellen. 3-Deazaneplanocin A (1,0 μM) induceert apoptose in OCI-AML3 (~50%) en HL-60-cellen (~50%), en een vermindering van meer dan 90% in kolonie groei na 48 uur. 3-Deazaneplanocin A verlaagt de EZH2-niveaus en remt trimethylering van lysine 27 op histone H3 in de HL-60- en OCI-AML3-cellen en in primaire AML-cellen. 3-Deazaneplanocin A-behandeling induceert p16, p21, p27 en FBXO32, terwijl cyclin E- en HOXA9-niveaus worden verlaagd. 500 nM 3-Deazaneplanocin A induceert differentiatie van HL-60 naar CD11b⁺-cel met bijna 3-voudige tijd na 48 uur. [2] 3-Deazaneplanocin A heeft uitstekende activiteit tegen verschillende virale typen. 3-Deazaneplanocin A is actief tegen vesiculaire stomatitis in L929-cellen, parainfluenza 3 in H.Ep-2, vaccinia- en gelekoortsvirussen in vero-cellen met IC50 van respectievelijk 0,2, 3,6, 2,1 en 2,9 μg/mL. [3] 3-Deazaneplanocin A vertoont een sterk en uniform leishmanistatisch effect op Amerikaanse Leishmania (L mexicana en L brasiliensis) stammen in de studie met een gemiddelde ID50 van 96 ng/mL, maar vertoont geen remming tegen de verschillende geteste T. cruzi- en T. rangeli-stammen met concentraties tot 10 μg/mL. Bij een dosis van 200 ng/mL remt 3-Deazaneplanocin A S-adenosyl-L-3H-methylmethionine en 3-thymidine-incorporatie door promastigoten na vier dagen. Bij een dosis van 100 ng/mL elimineert 3-Deazaneplanocin A ongeveer 56% van de L mexicana en L brasiliensis uit geïnfecteerde menselijke macrofagen. [4]

3-Deazaneplanocin A vertoont in vivo antileukemie activiteit. 3-Deazaneplanocin A in doses van 8 mg/kg vertoont in vivo antivirale activiteit tegen vacciniavirus in een muis staartpokken test met een mediaan van 0,0 pokkenstaart (84% bescherming). [3] 3-Deazaneplanocin A in doses variërend van 0,5 tot 1,5 mg/kg/dag, verminderde significant de ontwikkeling van cutane leishmaniale infectie die werd geproduceerd bij inteelt BALB/c muizen door L. b. guyanensis inoculatie. [4] 3-Deazaneplanocin A induceert een massaal verhoogde interferon-α productie bij met Ebola-virus geïnfecteerde muizen. 3-Deazaneplanocin A (s.c. injectie van 2 mg/kg na infectie) voorkomt de dood bij muizen geïnfecteerd met 1000 pfu (30 000 LD50) van muisaangepast EBO-Z. Behandeling met 3-Deazaneplanocin A op dag 1 vermindert de gemiddelde serum virale titers op dag 2 met 100-voudig en op dag 3 met 100 000-voudig, vergeleken met placebocontroles, en resulteert in een gemiddeld serum IFN-α niveau van 1420 pg/mL op dag 2 en 1830 pg/mL op dag 3. [5]

• S-adenosylhomocysteïne hydrolase activiteitsbepaling

  Het reactiemengsel dat wordt gebruikt voor de bepaling van AdoHcyase bevat, in een eindvolume van 0,5 ml, 50 mM kaliumfosfaat (pH 7,6), 5 mM dithiothreitol, 1 mM EDTA, 10% glycerol en het enzym. L-[8- ^14C]AdoHcy wordt gebruikt als substraat en 5 eenheden kalfintestinale adenosine deaminase zijn inbegrepen. De reactie wordt gestopt door de toevoeging van 100 μL 5 M mierenzuur, en het reactiemengsel wordt vervolgens op een kolom (0,8×2,5 cm) van SP-Sephadex C-25 gegoten, eerder geëquilibreerd in 0,1 M mierenzuur. Elk reageerbuisje wordt gespoeld met 0,5 ml 0,1 M mierenzuur. [¹⁴C]Inosine gevormd wordt van de kolom geëlueerd met 3,5 ml 0,1 M mierenzuur in een scintillatieflacon. De radioactiviteit wordt bepaald na toevoeging van 10 ml scintillatievloeistof. De gebruikte hoeveelheid enzym is ongeveer 105 pU, of 75 ng van het gezuiverde enzym. Eén eenheid is de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 pmol product te vormen in 1 minuut bij 37 ℃.

• Cellijnen

  Human acute myeloid leukemia HL-60

• Concentraties

  ~1 μM

• Incubatietijd

  2 days

• Methode

  Cells are treated with the indicated concentrations of 3-Deazaneplanocin A for 48 hours. After the designated treatments, cells are harvested and washed twice with PBS, and approximately 500 cells are plated in complete Methocult and cultured for 7 to 10 days at 37 ℃ in a 5% CO₂ environment. Cells are dyed with crystal violet, and relative colony density is determined by solubilizing the crystal violet dye in 10% acetic acid followed by measurement of absorbance at 450 nm.

• Dierlijke modellen

  Human acute myeloid leukemia xenografts HL-60

• Doseringen

  1 mg/kg

• Toediening

  initiated on day 7 and administered twice per week (Tuesday-Thursday) intraperitoneally for 2 weeks