AG-490

L'AG-490 inhibe la prolifération cellulaire dépendante de HER-2 avec un IC50 de 3,5 μM. [1] Correspondant à l'inhibition spécifique dose-dépendante de JAK2 constitutivement activée dans les cellules de leucémie aiguë pré-B (ALL), ce composé (5 μM) bloque presque complètement la croissance de toutes les cellules ALL en induisant la mort cellulaire programmée, sans effet délétère sur l'hématopoïèse normale. Ce produit chimique n'inhibe pas les activités de Lck, Lyn, Btk, Syk et Src. [2] Il (60-100 μM) bloque l'activation constitutive de Stat3sm et inhibe la croissance spontanée ainsi que celle induite par l'interleukine 2 des cellules tumorales de mycosis fongoïde (MF) avec des valeurs IC50 de 75 μM et 20 μM, respectivement. [3] Ce composé inhibe puissamment la croissance des lymphocytes T humains médiée par l'IL-2 avec un IC50 de 25 μM en bloquant les activités de JAK3 et STAT5a/b. [4] Il inhibe significativement l'activation constitutive de Stat3 dans les cellules MOPC, MPC11 et S194, entraînant une apoptose dramatique dose-dépendante. [6] Ce produit chimique (100 μM) inhibe la phosphorylation d'Akt, inhibe l'activation du facteur nucléaire-κB et provoque l'activation de GSK-3β, entraînant la réduction de c-Myc. Il (50 μM) peut induire l'apoptose des cellules BaF3 exprimant les mutants T315I et E255K de Bcr-Abl. [7] Ce composé à 30 μM inhibe non seulement la phosphorylation de JAK2 de type sauvage induite par l'Epo, mais aussi la phosphorylation constitutive du mutant JAK2 V617F. Il inhibe également puissamment la croissance cellulaire indépendante des cytokines induite par le mutant JAK2 V617F dans les cellules BaF3. [8]

L'administration d'AG-490 réduit drastiquement le nombre de cellules CD45⁺ et HLA-DR⁺ de 48% et 46% dans la moelle osseuse de souris non traitées, ainsi que de 38% et 22% dans la rate de souris non traitées à des niveaux indétectables. [2] L'administration in vivo de ce composé provoque l'apoptose des cellules tumorales de myélome murin mais n'inhibe pas l'activation des macrophages médiée par l'IL-12 et la production d'IFN-γ par les lymphocytes. [6] Conformément au blocage in vitro de l'activité du mutant JAK2 V617F, le traitement avec ce produit chimique à 0,5 mg/jour pendant 10 jours inhibe efficacement la tumorigenèse et l'invasion des cellules tumorales induites par le mutant JAK2 V617F chez les souris nues. [8] La thérapie combinée avec cet agent et l'IL-12 induit des effets antitumoraux plus importants que l'un ou l'autre agent seul dans un modèle de tumeur de myélome murin. [6]

• Autophosphorylation de la kinase in vitro

  L'AG-490 est dissous dans du DMSO 10%-H₂O-éthanol 45%. Les extraits membranaires bruts (0,125 μg/mL) sont préactivés avec de l'EGF (20 nM) dans un tampon HEPES 50 mM, pH 7,6, et 125 mM NaCl, pendant 15 minutes à 4 °C. L'activité d'autophosphorylation de la kinase EGFR ou ErbB2 est dosée à 4 °C pendant 30 secondes dans des plaques de 96 puits en forme de V. Les extraits membranaires (8 μL) sont ajoutés à chaque puits contenant le mélange réactionnel (12 μL, 50 mM, HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 12 mM M₈Ac₂, 2 mM MnCl₂, 1 mM NaVO₃, 1 μM ATP, et 1 μCi[γ-³²P]ATP, concentrations finales) et des concentrations croissantes de ce composé (4 μL). Après terminaison par addition de tampon d'échantillon chaud, les échantillons sont analysés sur un mini-gel d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide-SDS à 6%, les gels sont séchés et une autoradiographie est effectuée pendant la période d'exposition linéaire. Les bandes du récepteur sont scannées densitrométriquement, et les résultats sont analysés par le programme Ez-Fit. Pour l'analyse de l'autophosphorylation de JAK2, JAK2 est immunoprécipité à l'aide d'un anticorps anti-JAK2 à partir de lysats de cellules G2 prétraitées pendant 16 heures avec des concentrations croissantes de ce produit chimique (0-50 μM). Les complexes immuns sont ensuite immunotransférés avec un anticorps anti-phosphotyrosine. Une inhibition dose-dépendante de l'activité kinase in vitro est démontrée en évaluant l'autophosphorylation de JAK2.

• Lignées cellulaires

  Pre-B ALL

• Concentrations

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~ 50 μM

• Temps d'incubation

  16 hours

• Méthode

  Cells are exposed to different concentrations of AG-490 for 16 hours. For the determination of cell proliferation, [³H]tymidine (1 μCi) is added 6 hours or more before the cultures are terminated. Cells are then collected and samples counted in a liquid scintillation counter.

• Modèles animaux

  SCID mice intravenously injected with ALL cells

• Dosages

  0.85 mg + 0.5 mg daily

• Administration

  Continuous pump infusion supplemented with daily intraperitoneal injections